1. Imagem em tempo real da infecção por M. abscesso<ol><li>Mount anestesiou embriões com tricaína em agarose com ponto de fusão baixo a 1% em uma placa de Petri de 35 mm antes das observações de microscopia de epifluorescência. Use um prato de vidro para microscopia confocal invertida ou uma lâmina de depressão de cavidade única para microscopia confocal vertical. Oriente o embrião para a posição desejada e cubra a agarose solidificada com água de peixe contendo tricaína.</li><li>Use um microscópio de epifluorescência com alvo 10X para aquisição e transmissão sequencial de fluorescência do embrião inteiro. Alternativamente, use um microscópio confocal com objetivos 40X ou 63X para visualizar a atividade das células imunes após uma infecção.</li></ol>

<table class='ck-table-resized'><tbody><tr><td>Agarose de baixa fusão</td><td>Sigma-Aldrich</td><td> </td><td> </td></tr><tr><td>Sal de metanosulfonato de etil 3-aminobenzoato (Tricaine)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td> </td></tr></tbody></table>

imagens ao vivo das interações hospedeiro-patógeno em embriões de peixe-zebra infectados com mycobacterium abscessus

Fonte: <a href='https://app.jove.com/v/53130/deciphering-imaging-pathogenesis-cording-mycobacterium-abscessus'>Bernut, A., et al. Decifração e Imagem da Patogênese e Cordamento do Mycobacterium abscessus em embriões de peixe-zebra. J. Vis. Exp. (2015)</a>Este vídeo demonstra um protocolo que utiliza embriões transgênicos de peixe-zebra expressando macrófagos fluorescentes e infectados com a cepa áspera fluorescente Mycobacterium abscessus para visualizar as interações hospedeiro-patógeno. Ele revela como o cordão extracelular possibilita a evasão imunológica, promovendo a sobrevivência bacteriana e danos às células do hospedeiro.

Imagens ao vivo das interações hospedeiro-patógeno em embriões de peixe-zebra infectados com Mycobacterium abscessus

Source: Bernut, A., et al. Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (2015)This video ...

Comece com embriões anestesiados, transparentes e transgênicos de peixe-zebra que expressam macrófagos marcados fluorescente.Os embriões são pré-injetados no músculo caudal com a cepa áspera marcada por Mycobacterium abscessus marcada fluorescentemente para induzir uma infecção localizada.A ausência de glicopeptidolípidos de superfície nessas bactérias promove sua agregação.Imobilize os embriões em agarose de baixo ponto de fusão e oriente-os para expor o local da infecção.Quando a agarose solidificar, adicione água para peixes contendo um agente anestésico para manter a anestesia e evitar a desidratação.Monitore a infecção em tempo real por meio de microscopia de fluorescência.Após a infecção, os macrófagos endógenos migram em direção às bactérias e fagocitam células individuais.No entanto, algumas bactérias formam cordões — agregados extracelulares alongados que se replicam, se espalham e resistem à fagocitose, causando morte da célula hospedeira e infiltração imunológica.Apesar disso, as células imunes falham em eliminar os cordões, permitindo que bactérias e células mortas do hospedeiro se acumulem e formem um abscesso.Isso revela cording como um M-chave. Estratégia de evasão imune para abscessos .Para imagens ao vivo da infecção por M. abscessus , monte embriões anestesiados com tricaine em agarose de 1% de ponto de fusão baixo em uma placa de Petri de 35 milímetros com fundo de vidro para microscópio invertido ou em uma lâmina de depressão de cavidade única para microscopia confocal vertical. Oriente o embrião para a posição desejada e cubra a agarose solidificada com água de peixe contendo tricaína. Por fim, utilize um microscópio de fluorescência com objetiva 10X ou um microscópio confocal de fluorescência com objetivos 40X ou 63X para aquisição e transmissão sequencial de fluorescência do embrião.

live-imaging-host-pathogen-interactions-zebrafish-embryos-infected

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

Microbiologia

Bacterial Pathogenesis and Host Interactions

Patogênese Bacteriana e Interações com o Hospedeiro

bacterial-pathogenesis-and-host-interactions

Infection Imaging & Detection

Imagem e Detecção de Infecções

Live Imaging of Host-Pathogen Interactions in Zebrafish Embryos Infected with Mycobacterium abscessus

232 visualizações. Comece com embriões anestesiados, transparentes e transgênicos de peixe-zebra que expressam macrófagos marcados fluorescente.Os embriões são pré-injetados no músculo caudal com a cepa áspera marcada por Mycobacterium abscessus marcada fluorescentemente para induzir uma infecção localizada.A ausência de glicopeptidolípidos de superfície nessas bactérias promove sua agregação.Imobilize os embriões em agarose de baixo ponto de fusão e oriente-...

Imagens ao vivo das interações hospedeiro-patógeno em embriões de peixe-zebra infectados com Mycobacterium abscessus

Neste artigo

Resumo

Protocolo

Materiais

Reimpressões e permissões

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Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Agarose de baixa fusão	Sigma-Aldrich
Sal de metanosulfonato de etil 3-aminobenzoato (Tricaine)	Sigma-Aldrich	A5040