Avaliação da Virulência Bacteriana Usando o Ensaio de Toxicidade Líquida C. elegans

Resumo

Fonte: Chen, Y., et al. Avaliando a Virulência e Patogênese da Infecção por Aeromonas em um Modelo de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo demonstra o Ensaio de Toxicidade Líquida de C. elegans com Aeromonas, um método usado para avaliar a virulência bacteriana medindo a sobrevivência de vermes em um ambiente líquido com poucos nutrientes. O ensaio revela patogenicidade específica da cepa com base na extensão do dano induzido por toxinas e na mortalidade em C. elegans.

Protocolo

1. Ensaio de Toxicidade Líquida de C. elegans com Aeromonas

NOTA: Para evitar contaminação, os passos devem ser realizados em um exaustor de fluxo laminar.

1. No dia seguinte à semeadura dos vermes L1 na placa ENGM (meio de crescimento de nematoides enriquecidos) espalhe com E. coli OP50, colhe uma única colônia de cada uma das quatro cepas Aeromonas e E. coli OP50, e cultive com 5 mL de caldo de 5 mL cada a 37 °C por 16 horas.
   NOTA: No protocolo, foram usadas as seguintes cepas bacterianas: E. coli OP50, a fonte alimentar norm....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Incubadora shaker	YIH DER	LM-570R	Incubação de bactérias
NaCl	SIGMA	31434	Preparação do meio de cultura
MgSO₄	SIGMA	M7506	Preparação do meio de cultura
Agar	Difco	214530	Preparação do meio de cultura
CaCl₂	SIGMA	C1016	Preparação do meio de cultura
Colesterol	SIGMA	C8503	Preparação do meio de cultura
Etanol	SIGMA	32205	Preparação do meio de cultura
KOH	SIGMA	P5958	Preparação do meio de cultura
Placa de Petri de 6 cm	ALPHA PLUS	46	Preparação da placa de ágar
Placa de 96 poços	FALCON	353072	Ensaio líquido
Peptôna bacteriana	Affymetrix/USB	AAJ20048P2	Preparação do meio de cultura
Extrato de levedura	SIGMA	92144	Preparação do meio de cultura
Ácido cítrico•H₂O	SIGMA	C1909	Preparação do meio de cultura
Tri-potássio•H₂O	SIGMA	104956	Preparação do meio de cultura
FudR	SIGMA	1271008	Preparação do meio de cultura
EDTA dissódico	SIGMA	E1644	Preparação do meio de cultura
Triptona	SIGMA	16922	Preparação do meio de cultura
Sistema de microscópio	Nikon	Eclipase Ti invertida	Imagem de microscópio
Câmera CCD Científica	QImaging	Retiga-2000R Fast 1394	Imagem de microscópio