Colonização Intestinal e Indução de Diarreia por Vibrio cholerae em Peixe-Zebra Adulto

Resumo

Fonte: Nag, D., et.al. Quantificação da colonização e diarreia por Vibrio cholerae no modelo adulto de peixe-zebra. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra a inoculação de peixes-zebra adultos com uma cepa patogênica de Vibrio cholerae para estudar a colonização intestinal e os desfechos da doença. Mostra como toxinas bacterianas prejudicam a integridade intestinal, levando a vazamento de líquido, secreção de muco e diarreia aquosa antes que os peixes estejam preparados para análise adicional.

Protocolo

1. Inoculação de peixe-zebra por imersão
   NOTA: Esse método de exposição se assemelha ao curso natural da infecção.
   1. Preparação do Vibrio cholerae
      1. Inocule 5 mL de caldo de lisogênia (LB) com uma colônia isolada de V. cholerae a partir de uma placa LB e incube a 37 °C com agitação (180 rpm) por 6–8 horas (cultura durante a noite).
      2. Inocule 25 mL de meio LB fresco autoclavado em um frasco cônico de 250 mL com 50 μL da cultura acima durante a noite. Incube-a por 16–18 horas a 37 °C com agitação (150 rpm).
      3. Leia a ....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Instrumento
Incubadora	NUAIRE, Plymouth, MN	Fluxo Automático
Materiais
Béqueres de vidro de 400 ml	Pyrex
Tampas perfuradas	Suporte para micropontas com furos da caixa de ponteiras
Sistema de Aquário	Aquaneering, San Diego, CA
Purificador de Água RO	Aqua FX	TK001
Rede de pesca	Marina
Alimento para peixes	Tetra-nadadeira
Placa de Petri	Fisher Brand, Hampton, NH	FB0875713
Tubo centrífugo de 1,5 ml	Midsci, Valley Park, MO	AVSS1700
Tubos de ensaio	Pyrex	9820
Micropipetas	Sartorius Biohit, Göttingen, Alemanha	M1000/M200/M20
Dicas	Genesee Scientific, San Diego, CA	24-150RS/24-412
LB Medium
Trípton	BD em Biociências, San Jose, CA	211705
Extrato de levedura	BD em Biociências, San Jose, CA	212750
NaCl	Fisher Scientific, Hampton, NH	BP358-212
Agar	BD em Biociências, San Jose, CA	214010