Quantificação da Carga Bacteriana Tecidular em um modelo camundongo de infecção intestinal crônica

Abstract

Fonte: Lo, B. C., et al. Fibrose intestinal induzida por infecção crônica por salmonela. J. Vis. Exp. (2019)

O vídeo demonstra a quantificação da carga bacteriana em um modelo murino de infecção crônica com Salmonella typhimurium resistente à estreptomicina. Após a eutanásia e dissecação estéril, tecidos cecais e esplênicos são colhidos, homogeneizados com contas de aço para liberar bactérias e diluídos em série. As diluições são placadas em ágar seletivo, e colônias visíveis são contadas para estimar a carga bacteriana por grama de tecido nos locais intestinais e sistêmicos.

Protocol

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê local de cuidados com animais institucionais e pelo conselho veterinário JoVE.

1. Preparação de culturas de Salmonella Typhimurium ΔAroA para gavage oral de camundongos

1. A partir de um estoque congelado de glicerol de S. Typhimurium ΔAroA, prepare uma placa de estrias usando ágar Luria-Bertani (LB agar) contendo 100 μg/mL de estreptomicina com um laço inoculante estéril. Incube durante a noite a 37 °C. Placas de estrias podem ser armazenadas até uma semana a 4 °C.
2. Um dia antes da infecção, prepare o antibiótico dissolvendo ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tubos de trava segura de fundo redondo de 2 ml	Eppendorf	22363344
Contas de aço inoxidável	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Pontas de Pipeta de Orifício Grande	Fisher	2707134
Placas megabloco de 2 mL	Sarstedt	82.1972.002
Agulhas de gavage	FST	18061-22
Sulfato de estreptomicina	Sigma	S9137
Moinho misturador	Retsch	MM