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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê local de cuidados com animais institucionais e pelo conselho veterinário JoVE.
1. Coletar amostras do lúmen vaginal para quantificar a carga do GBS
- Prepare um tubo microcentrífugo de 1,5 ml por camundongo, adicionando 100 μl de soro salino tamponado com fosfato (PBS). Pouco antes de fazer o swab, pré-umede o swab no PBS.
- Imobilize o rato e insira o swab 10 mm no lúmen vaginal. Gire suavemente o swab 4 vezes no sentido horário e 4 vezes no sentido anti-horário, aplicando uma leve pressão na parede vaginal.
- Transfira o swab para o tubo microcentrífuga de 1,5 ml com 100 μl de PBS. Antes do revestimento, faça vórtice no tubo da microcentrífuga por ~15 segundos para liberar as bactérias do swab. Diluir em série cada amostra em PBS e placar 20 μl de diluições de 1:10 a 1:10.000 em placas de ágar de meio diferencial preparadas conforme as instruções do fabricante. Incube as placas a 37 °C por 24 horas. Colônias do Grupo B de Streptococcus (GBS) aparecem de cor rosa brilhante ou malva. Outras floras endógenas serão inibidas ou aparecerão como colônias azuis, brancas ou cinzas.