Preparando uma Cultura Bacteriana do Solo para Infecção por Bacteriófagos

Resumo

Fonte: Cross, T., et al., Uma Técnica de Enriquecimento Otimizada para o Isolamento de Espécies de Bacteriófagos de Arthrobacter a partir de Isolados de Amostras de Solo. J. Vis. Exp.(2015)

Este vídeo demonstra a preparação de uma cultura bacteriana para a produção de bacteriófagos. Ele cobre as etapas de inoculação de uma bactéria do solo em um frasco com defletor, promovendo crescimento uniforme por aeração e agitação, e monitorando a densidade celular usando medições ópticas de densidade. Quando a cultura atinge a fase ideal de crescimento, está pronta para a produção eficiente de bacteriófagos.

Protocolo

Preparação de Células de Artrocatro para Isolamento de Fagos

• Cultura Arthrobacter sp. Colônias KY3901 estriadas em uma placa de ágar Luria Bertani (LB) incubadas a 30 °C por 2-3 dias. Escolha uma colônia e use um laço estéril para adicioná-la a 250 ml de LB de caldo em um frasco de cultura com defletores e incube em um incubador agitado a 225 rpm a 30 °C.
• Permitir aproximadamente 24 horas de crescimento para obter células de fase exponencial/estacionária inicial para experimentos de infecção por fagos. Monitore de perto o estado do crescimento bacteriano para evitar que as células entrem no estado médio a tardio estacionário.
  NOTA: O crescimento celular deve consistir em uma densidade óptica OD₆₀₀ entre 0,5 e 0,0,7 para os procedimentos/etapas de isolamento e purificação de fagos.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Pó de caldo LB	Fisher	BP9722-2
Ágar granulado	Fisher	BP1423-2
Válvulas Eppendorf	Fisher	05-408-129
Pipetas individuais de 5 ml	Fisher	13-678-11D
Tubos cônicos de 50 ml	Fisher	76002844
Tubos cônicos de 15 ml	Fisher	76002845
10 ml pipetas individuais	Fisher	13-676-10J
25 ml pipetas individuais	Fisher	13-676-10K