Infecção do Trato Urinário Associada a Cateter em um Modelo de Camundongo

Resumo

Fonte: Conover, M. S., et al., J. Estabelecimento e Caracterização de ITU e CAUTI em um modelo de camundongo. J. Vis. Exp. (2015)

Este vídeo demonstra o procedimento para montar e implantar um cateter transuretral em uma camundonga, seguido pela inoculação bacteriana para estabelecer infecção urinária associada ao cateter e investigar interações hospedeiro-patógeno mediadas por biofilme.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê local de cuidados com animais institucionais e pelo conselho veterinário JoVE.

1. Protocolo Modelo CAUTI (Infecção do Trato Urinário Associada a Cateter), Preparação da Agulha do Cateter para Modelo CAUTI

1. Remova a tampa da agulha de 30 G. Corte um pedaço de tubo PE10 de 7 mm (polietileno 10) e um pedaço de tubo de silicone de 5 mm, como o RenaSIL. Enfie a agulha com tubo PE10 até que o tubo toque a base da agulha.
2. Depois, alimente a peça de 5 mm na agulha contendo PE10. Os sistemas UV (ultravioleta) esterilizam os conjuntos das agulhas durante a noite.
   NOTA: Ao carregar o tubo de silicone, deixe aproximadamente 1 mm do tubo se estendendo além da ponta da agulha.

2. Preparação de Inoculo Bacteriano OG1RF de E. faecalis

1. Prepare o inoculo OG1RF começando 48 horas antes do dia da inoculação. Estrie o OG1RF em uma placa de BHI (infusão cerebral cardíaca) a partir de uma calha congelada.
2. Escolha uma colônia e inocule em 10 ml de BHI e cultive estaticamente por 18 horas a 37 °C. Centrifuge a cultura e lave o pellet (3 vezes) em volumes de 1 ml de PBS estéril 1x.
3. Ressuspenda o pellet bacteriano em 1x PBS (soro salino tamponado com fosfato). Meça a densidade óptica bacteriana e ajuste a concentração para o tamanho desejado do inoculo. A concentração padrão do inóculo utilizado é^10,7; No entanto, isso pode variar devido ao design do estudo

3. Implantação de cateter

1. Limpe a estação de trabalho com etanol 70% e cubra a área com uma tampa absorvente (ou use uma capela de fluxo estéril).
2. Prenda a agulha do cateter em uma seringa vazia de 1 ml (TB ou tuberculina). Corte um pedaço de parafilm de 1 polegada quadrada e passe um pouco de lubrificante cirúrgico (aproximadamente do tamanho de uma moeda de dez centavos) por cima.
   NOTA: Duas agulhas diferentes são usadas para a deposição do cateter e para o inóculo, minimizando a inoculação acidental devido à manipulação mecânica necessária para o implante do cateter. Isso também permite a conveniência de preparar menos agulhas de inoculação.
3. Anestesie os camundongos C57BL/6 colocando-os em um pote de vidro de 32 onças contendo uma bola de infusão de chá com bolas de algodão embebidas em 3 ml de isoflurano ou em uma câmara vaporizadora (seguindo o protocolo do fabricante) até ficarem inconscientes, mas ainda respirando normalmente (1 respiração/segundo).
4. Depois, coloque o rato de costas em um papel toalha e abra as pernas. Cubra o nariz do camundongo com um cone nasal ou um tubo cônico de 50 ml com bolas de algodão contendo uma pequena quantidade (aproximadamente 1-2 ml) de isoflurano.
   ATENÇÃO: Isoflurano é um anestésico inalado. Use em um local bem ventilado e minimize a inalação pelo pesquisador.
5. Palpe suavemente a bexiga para induzir a micção e garantir que a bexiga esteja esvaziada. Limpe a área periuretral com um lenço 100% de etanol.
6. Desinfete a área periuretral com solução 10% de povidona-iodo usando um aplicador em ponta de algodão. Toque a agulha/seringa de inoculação, apontando primeiro, para dentro do lubrificante cirúrgico.
   NOTA: Povidona-iodo é usado para implantação de cateter, que é uma solução asséptica mais forte do que o álcool. A implantação do cateter requer mais manipulação mecânica para inserir o cateter e, portanto, tem maior potencial de contaminação.
7. Insira o cateter na abertura uretral. Uma vez dentro, use uma pinça para empurrar a peça (7 mm PE10) em direção à bexiga, empurrando assim o pequeno cateter (de silicone de 5 mm) e depositando-o na bexiga. Remova a agulha, com o tubo de 7 mm ainda preso, imediatamente.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Material para preparação de cateter e agulha:
Agulhas de 30 G	BD Precision Glide	305106	30 G x 1/2 (0,3 mm x 13 mm)
Tubo de polietileno PE10	BD	427400	Diâmetro interno -0,011 pol (0,28 mm); Diâmetro externo – 0,024 pol (0,61 mm)
RenaSIL 025 tubos de silício curados com platina	Braintree Scientific, Inc	SIL 025	Diâmetro interno - 0,012 x diâmetro externo 0,025, bobina de 25 pés
Material para infecções:
Isofluorano – Isotesia	Mordomo Schein	29405	250 ml
Jarro de Vidro Transparente de Bordas Retas	Caça ao Kimble	5413289V 21
Infusor de Chá de Aço Inoxidável	Schefs-Amazon		Infusor Premium de Chá a Granel da Schefs - Aço Inoxidável - Grande Capacidade -
Bolinhas de algodão não estéreis	Fisherbrand	22-456-880
Tubos Falcon de 50 ml	VWR	89039-660
Isotec 3 - vaporizador	Ohmeda	1224478
Soco na orelha	Fisher Scientific	13-812-201	(quando necessário)
Solução de betadina	Solução de betadina		Solução tópica de Povidie-iodo 10%
Cotonetes	Fisher Scientific	22-037-924	6 polegadas
Fraldas para banco	Fisherbrand	14206 63	Almofadas Absorventes (tapetes de 20"X36")
Lubrificante cirúrgico	Surgilube	0281-0205-36
Tesoura dissecadora	Ferramentas de Ciência Fina, INC	14084-08
Micro-Adson Forceps	Ferramentas de Ciência Fina, INC	11018-12
1 ml de seringa	BD	309659	Ponta deslizante de tuberculina
Parafilm	Bemis	PM996	4 polegadas x 125 PÉS
Rack Eppendorf	Fisherbrand	05-541-1
Tubos Eppendorf	MIDSCI	AVX-T-17-C
Colheita de cateteres, bexigas e rins:
Homogeneizador	PRO Scientific INC	Bio-Gen Pro 200
Tubo de fundo arredondado de polipropileno de 5 ml	BD	352063	para homogeneização de órgãos
Papel toalha	Georgia-Pacific
Etanol	Pharmco-AAPER	11100020S	200 proof
Placas de Poliestireno Transparente Costar™ para 96 Poços	Corning	3788
1x soro fosfatado sódico	Sigma-Aldrich	P3813
Limpador ultrassônico BRANSONIC 1210	Branson Ultrasonics Corporation	1210