Terapia de Luz Azul para Infecções Bacterianas Resistentes a Medicamentos em Queimaduras em Modelo de Camundongo

Resumo

Fonte: Wang, Y., et al. Investigação In Vivo da Terapia Antimicrobiana de Luz Azul para Infecções por Queimaduras por Acinetobacter baumannii multirresistentes usando imagem por bioluminescência. J. Vis. Exp. (2017)

Este vídeo demonstra o procedimento para tratar infecções por queimaduras causadas por bactérias bioluminescentes e resistentes a medicamentos em camundongos, utilizando terapia de luz azul, seguido por imagens por bioluminescência para monitorar a eficácia do tratamento.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê local de cuidados com animais institucionais e pelo conselho veterinário JoVE.

1. Terapia Antimicrobiana de Luz Azul para Infecção por A. baumannii em Camundongos

1. Anestesie os camundongos com uma injeção intraperitoneal de um coquetel cetamina-xilazina (100 mg/kg - 20 mg/kg). A ausência do reflexo palpebral sugere uma profundidade anestésica adequada.
2. Divida aleatoriamente os camundongos em um grupo tratado com aBL (n = 10) e um grupo controle não tratado (n = 10).
3. Para o grupo tratado com luz azul antimicrobiana (aBL), cubra os olhos dos camundongos com papel alumínio para evitar a superexposição à luz. Coloque as queimaduras do camundongo diretamente sob o diodo emissor de luz (LED), com a tampa de uma placa de Petri de 35 mm sob o abdômen do camundongo para manter as costas horizontais.
4. Substitua o medidor de energia/potência mencionado no passo 3.5 por um mouse em uma placa de Petri quadrada. Ajuste a altura do mouse de volta para uma posição em que a distância entre a abertura do LED e a superfície da queima do mouse seja igual à que existe entre a abertura do LED e o nível do sensor de luz do medidor de energia/energia.
5. Irradie as queimaduras infectadas com uma irradiância de 100 mW/^cm2. Administre aBL em doses de 72 J/^{cm 2} até que uma dose total de 360 J/^{cm 2} seja atingida (por exemplo, 0, 72, 144, 216, 288 e 360 J/^{cm 2}). Após cada dose de luz, realize imagens de bioluminescência para os camundongos.
6. Para o grupo controle não tratado, realize imagens bioluminescentes das queimaduras de camundongo, usando os mesmos intervalos de tempo usados no grupo tratado com aBL.
7. Antes da recuperação dos camundongos, coloque-os na cama cirúrgica aquecida com água para evitar perda de calor e hipotermia. Observe a atividade e o reflexo palpebral dos camundongos até a recuperação. Após a recuperação dos ratos, aloje-os 2-3 por gaiola.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Série III	Imagem pré-clínica in vivo
LED de diodo emissor de luz	VieLight Inc, Toronto, Canadá	415 nm	Fonte de luz para iluminação
Medidor de potência/energia	Thorlabs, Inc., Newton, NJ	PM100D	Detector de irradiância de luz
Rato	Laboratórios Charles River, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 semanas de idade, 17-19 g de peso
Acinetobacter baumannii	Centro Médico do Exército Brooke, Fort Sam Houston, TX	Isolado clínico	Cepa luminescente engenheirada
Soro Fosfatado Tamponado, 1x Solução	Fisher Scientific	BP24384	Um tampão padrão de fosfato usado em muitos procedimentos biomoleculares
Pontas de pipeta Fisher Scientific Redi-Tip, 1-200 μL	Fisher Scientific	02-707-502	Pontas de Pipeta
Bloco de Latão	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm por 10 mm	Para a criação de queimaduras em camundongos
Luvas Extreme Dragon PBI/Kevlar de alta intensidade	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	Luvas Resistentes ao Calor
Pratos Greiner	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
Placa Quente Digital Corning	Companhia de Instrumentos Cole-Parmer, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, para água fervente
Cama cirúrgica aquecida com água para rato/rato	Sistemas E-Z	EZ-211	Previne a perda de calor e a hipotermia durante a cirurgia
Pomada veterinária	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5%, Augensalbe	Pomada oftálmica para prevenir o ressecamento ocular