Imagens de Mudanças Morfológicas em Bactérias usando Microscopia de Fluorescência de Células Vivas

Abstract

Fonte: Brzozowski, R. S. et al. Microscopia de fluorescência de células vivas para investigar a localização de proteínas subcelulares e as alterações na morfologia celular em bactérias. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra microscopia de fluorescência de células vivas para visualizar mudanças morfológicas em tempo real nas bactérias. Ele descreve as etapas envolvidas na imagem, aquisição em time-lapse e deconvolução para obter imagens de alta resolução em tempo real.

Protocol

1. Imagem

1. No dia do experimento, ligue o sistema de microscópio. Inicie o software de imagem (veja Tabela de Materiais) clicando no ícone apropriado na área de trabalho. Inicialize o microscópio clicando na opção Inicializar Microscópio (botão representado com um microscópio) na caixa de diálogo de inicialização do software. Certifique-se de que a objetiva esteja totalmente abaixada usando o ajuste grosseiro do microscópio antes da inicialização.
   NOTA: Após a inicialização, três caixas de diálogo adicionais devem aparecer além do menu iniciar: resolve3D, coleta de dados e monitor de filtro.
2. Coloque....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agarose	Biorreagentes Fisher	BP160-100	Grau em Biologia Molecular - Baixo EEO
FM4-64	Invitrogen	T3166	Microscopia
Prato de fundo de vidro	MatTek	P35G-1.5-14-C	Microscopia
Microscópio	GE	DeltaVision Elite	Suporte personalizado para microscópio invertido Olympus IX-71; Torre de iluminação personalizada e módulo iluminador de luz transmitida. Objetivos: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLY 100X ÓLEO (N.A. 1.4, WD 0.12 mm); DIC Prism Nomarski para 100X Objectivo; Câmera CoolSnap HQ2; Conjunto SSI 7 cores; Câmara de controle ambiental - opaca.
PC190723	MilliporeSigma	3445805MG	Inibidor de FtsZ
SoftWorx	GE		Software de imagem fornecido pelo fabricante