Ensaio baseado em fluorescência para investigar interações entre receptores de macrófagos e antígenos bacterianos

Resumo

Fonte: Barbero, A. M., et.al. Ensaios de fluorescência para o estudo da interação entre Mycobacterium tuberculosis e o receptor imunológico SLAMF1. J. Vis. Exp. ( (2025)

Este vídeo demonstra um ensaio baseado em fluorescência para estudar a interação entre um receptor de macrófagos e antígenos do Mycobacterium tuberculosis . Antígenos marcados fluorescentemente em um coverslip são incubados com extratos de proteína de macrófagos, reticulados, marcados por anticorpos e visualizados por sinais de fluorescência sobrepostos.

Protocolo

1. Interação entre Mycobacterium tuberculosis e SLAMF1 por microscopia de fluorescência

1. Reticulação bactéria-proteína
   1. Introduza coberturas redondas de 12 mm em placas de cultura de 24 poços (1 cobertura por poço) usando pinças cirúrgicas de nariz redondo.
      NOTA: Limpe bem as coberturas com 70% de etanol. Se desejado, podem ser autoclavados ou esterilizados sob luz UV por 30 minutos.
   2. Incube o cobertor com 400 μL de 10 μg/mL de Poli-D-Lisina durante a noite a 4 °C. Cubra a placa com papel alumínio para protegê-la da luz.
   3. No dia se....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Anticorpo secundário Alexa Fluor 488	Invitrogen	A21121	Para microscopia de fluorescência
Anticorpo primário anti-SLAMF1	BioLegend	306302	Para microscopia de fluorescência
Aqua-Poly/Mount	Policiências	18606-20	Mídia de montagem
Coberturas 12mm	HDA	-	Para ensaio de interação por microscopia
EGS	ThermoFisher Scientific	21565	Para tratamento de reticulação
Formaldeído	Merck	K47740803613	Para tratamento de reticulação
Slides de vidro	Glass Klass	-	Para ensaio de interação por microscopia
Glicina	Sigma	G8898	Para tratamento de reticulação
Imager.A2	Carl Zeiss	430005-9901-000	Microscópio de fluorescência com módulo de iluminação Colibri 7
Poli-D-Lisina	Sigma Aldrich	A-003-M	Para tratamento de coverslips
Rodamina B	Sigma Aldrich	21955	Para M. Coloração por tuberculose