Inoculação de um patógeno bacteriano nas folhas de Arabidopsis por infiltração a vácuo

Resumo

Fonte: Rufián, J. S., et.al. Análise de célula única da expressão dos genes de Pseudomonas syringae no tecido vegetal. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demonstra um método de infiltração a vácuo para introduzir um patógeno bacteriano nas folhas das plantas de Arabidopsis . A abordagem utiliza uma suspensão bacteriana preparada e pulsos de vácuo para permitir uma entrada uniforme através dos estomas, resultando em infecção controlada nas folhas.

Protocolo

1. Inoculação de plantas de Arabidopsis

NOTA: Neste estudo, as cepas Pseudomonas syringae pv. tomate DC3000 e P. syringae PV. Foram usadas phaseolicola 1448A.

1. Prepare o inoculum de P. syringae.
   1. Retire a cepa de P. syringae de interesse de um estoque de glicerol de −80 °C em uma placa LB (10 g/L de triptona, 5 g/L de NaCl, 5 g/L de extrato de levedura e 16 g/L de ágar bacteriológico) suplementada com os antibióticos apropriados. Incube a 28 °C por 40-48 horas.
      NOTA: O uso de antibióticos é recomendad....

Resultados

Figura 1: Inoculação bacteriana e extração de apoplasto usando plantas de Arabidopsis . (A) Preparação do vaso com a malha metálica devidamente fixada. (B) Semear sementes usando um palito para dist.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Placas de Petri de 140 mm			Sem requisitos especiais
Ágar bacteriológico	Roko
Sulfato de gentamicina	Duchefa	G-0124
Monosulfato de canamicina	Fitotecnologia	K378
MgCl₂	Merk
NaCl	Merk
Silwet L-77	Cromton Europe Ltd
Triptona	Merk
Câmara de vácuo de 25 cm de diâmetro	Kartell	554
Bomba de vácuo	GAST	DOA-P504-BN
Extrato de Levedura	Merk
Ampicilina sódica	GoldBio