Monitoramento da colonização bacteriana das raízes de Arabidopsis thaliana em um sistema sem solo

Neste artigo

Resumo

Fonte: Harris, S. L., et al. Monitoramento da colonização bacteriana e manutenção nas raízes de Arabidopsis thaliana em um sistema hidropônico flutuante. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra um protocolo para monitorar a colonização de bactérias associadas às raízes em mudas de Arabidopsis thaliana cultivadas em um sistema sem solo. Após a colonização, as bactérias são deslocadas por sonicação, depois diluídas, placadas e incubadas para formar colônias que refletem a ligação e viabilidade bacteriana.

Protocolo

Coleta de bactérias para contagens celulares viáveis

NOTA: O número de bactérias por raiz de muda pode ser determinado em qualquer momento de incubação. A colonização pode ser monitorada entre 0 h e 18 h, enquanto a manutenção pode ser monitorada a partir de 18 h.

Remova as mudas da malha (Figura 1, passo 5). Coloque delicadamente pinças esterilizadas com chama abaixo das folhas (mas do lado da folha da malha) e belisque levemente o caule. Mexa as mudas para cima e afastando-as da malha para deslocar a raiz sem quebrá-la. Se a raiz quebrar, raspe suavemente a base da malha para coletar todo o comprimento.
Remova bactérias das raízes das plantas. Transfira as bactérias para poços de uma placa de 24 poços contendo 1 mL de_{ddH 2}0. Sonice as amostras.
Quantifique as bactérias nas raízes.
1. Realize diluições seriadas de 10 vezes das amostras sonicadas até uma diluição de ^10-6 no meio de crescimento bacteriano. Adicione 50 μL de cada diluição a placas de ágar individuais e espalhe com esferas de vidro estéreis. Incube as placas na temperatura ideal para bactérias até que as colônias individuais sejam contáveis.

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Resultados

Figura 1: Ensaio para colonização bacteriana e manutenção em raízes de A. thaliana . Mudas de A. thaliana cultivadas em malha plástica esterilizada foram transferidas para um meio de crescimento otimizado para bactérias [aqui, 0,1...