Infecção Intranasal por Herpesvírus Murino em Camundongos para Avaliar as Respostas Imunes do Hospedeiro

Resumo

Fonte: Zhang, J., et al. P. Análise da Sinalização Imune Inata na Evasão Viral da Produção de Citocinas. J. Vis. Exp. (2014)

Este vídeo demonstra a administração intranasal de herpesvírus murino em camundongos para induzir uma resposta imune específica no pulmão. O tecido pulmonar é posteriormente processado para obter sobrenadantes contendo citocinas, destinados à avaliação subsequente das respostas imunes do hospedeiro.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê local de cuidados com animais da instituição e pela banca veterinária de revisão da JoVE.

1. Secreção de Citocinas por ELISA em Camundongos Infectados com γHV68

1. Anestesie camundongos machos e fêmeas com idade entre 6 e 8 semanas da linhagem C57BL/6 (B6) (8-12 camundongos/grupo) por injeção intraperitoneal de 1,5 mg de cetamina/0,12 mg de xilazina, e inocule intranasalmente com 40 UFC (unidade formadora de placas) de γHV68 em 40 µl. Em diferentes momentos após a infecção, eutanazie os camundongos por inalação de CO₂, seguida de fratura cervical.
2. Abra o tórax com um corte lateral esquerdo ao longo do esterno e corte as costelas com tesoura afiada. Colete os tecidos pulmonares.
3. Colete metade do tecido pulmonar (lóbulo esquerdo) em tubos estéreis de 1,5 ml com tampa rosqueável contendo 500 µl de esferas de zircônia/sílica de 1,0 mm. Adicione 1 ml de DMEM (Meio de Eagle Modificado por Dulbecco) frio sem soro ao tubo e homogeneíze o tecido pulmonar por agitação com esferas durante 30 segundos. Resfrie os tubos em gelo por 2 minutos e repita esse processo uma vez.
4. Centrifugue os tubos (15.000 x g durante 10 minutos) a 4 °C, colete o sobrenadante e meça a produção de citocinas conforme descrito abaixo.
5. Meça as citocinas utilizando kits comerciais de ELISA (ensaio imunoenzimático) para citocinas, de acordo com as instruções do fabricante.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Kit ELISA para CCL5 de camundongo	R&D Systems	DY478
Contas de Zircônia/Sílica de 1,0 mm	BioSpec Products	11079110z