Crescimento Viral e Técnicas

Source: Tang, N., et al. Generating Recombinant Avian Herpesvirus Vectors with CRISPR/Cas9 Gene Editing. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the clonal isolation and PCR-based screening of recombinant herpesvirus following site-specific excision of a GFP marker. Fluorescence-activated cell sorting is used to isolate non-fluorescent infected cells, and junction PCR confirms retention of the target gene in GFP-negative clones.

Source: Cross, T., et al. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the isolation of Arthrobacter bacteriophages from a soil sample using enrichment and plaque assay techniques. It highlights the infection, amplification, and visualization of phages as clear lysis zones formed on a bacterial lawn.

Source: Morales Vasquez, D., et al. Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the protocol for carrying out plaque assay–based viral titration for quantifying infectious virus levels in tissue sample collected from a virus–infected mouse model.

Source: Vijayraghavan, S., Kantor, B. A Protocol for the Production of Integrase-deficient Lentiviral Vectors for CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockout in Dividing Cells. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the procedure for generating recombinant viral particles by transfecting embryonic kidney cells with plasmids encoding viral proteins and a gene of interest.

Source: Rustad, M., et.al. Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the purification of bacteriophages from a suspension containing host bacterial debris using a sucrose density gradient. It shows how the density gradient separates phages by buoyant density, enabling recovery of a visible band for resuspension and further analysis.

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Source: Nguyen, H., et al. Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates the propagation and harvesting of oncolytic herpes simplex virus in mammalian cell cultures, highlighting viral entry, replication, and the recovery of virus-loaded cells. It further shows methods for preserving infected cells for downstream processing.

Source: Nguyen, H., et al. Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the purification of an oncolytic virus from infected mammalian cell cultures using nuclease treatment, sequential centrifugation, membrane filtration, and sucrose cushion centrifugation.

Source: Huang, D., et al. Mosquito-Associated Virus Isolation from Field-Collected Mosquitoes. J. Vis. Exp. (2022).This video demonstrates the step-by-step procedure for the in vitro isolation of mosquito-associated viruses from mosquito homogenates using fibroblast-like mammalian cells.

Source: Eggers, C. H. Phage-Mediated Genetic Manipulation of the Lyme Disease Spirochete Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022).This video demonstrates the isolation of borrelial phage particles from a Borrelia burgdorferi suspension using polyethylene glycol-mediated phase separation. The sample is centrifuged, treated with a salt solution, and a molecular crowding agent to precipitate phages. Chloroform extraction is done to remove debris and concentrate phage particles. The purified phage...

Source: Pett, N., et al. T4 Bacteriophage and E. coli Interaction in the Murine Intestine: A Prototypical Model for Studying Host-Bacteriophage Dynamics In Vivo. J. Vis. Exp. (2024)This video demonstrates the purification of bacteriophages from bacterial cell lysates using sequential centrifugation, membrane filtration, chloroform extraction, centrifugal filtration, and buffer exchange to obtain a purified phage preparation.

Source: Van Lidth de Jeude, et al. A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the process of producing viral particles through transfection of embryonic kidney cells with plasmid–polyethylenimine complexes, which leads to viral genome expression, particle assembly, and virus collection in the medium.

Source: Saragliadis, A., et al. Producing Gene Deletions in Escherichia coli by P1 Transduction with Excisable Antibiotic Resistance Cassettes. J. Vis. Exp.(2018)This video demonstrates preparation of a bacteriophage lysate containing transducing particles. A donor strain is infected, plaques form, and the soft agar overlay is processed with chloroform to yield a clarified lysate for downstream analysis.

Fonte: Weger-Lucarelli, J., et al. Resgate e Caracterização de Vírus Recombinante a Partir de um Clone Infeccioso de Vírus Zika do Novo Mundo. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a recuperação do vírus Zika infeccioso por meio da eletroporação de RNA transcrito in vitro. O processo mostra como o RNA sintético inicia a infecção e leva à replicação viral em células cultivadas.

Fonte: Mackler, R. M., et al. Montagem e Purificação de Intassomos de Vírus Foamy Protótipos. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra a purificação de intassomos do vírus da foamy protótipo (PFV) a partir de uma suspensão mista de proteína-DNA utilizando extração com sal e cromatografia de exclusão por tamanho, obtendo complexos ativos para análises posteriores.

Fonte: Suzuki, Y., et al. Medição de RNA do vírus da dengue no sobrenadante de cultura de células infectadas por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demonstra o procedimento para preparar amostras virais para análise de PCR quantitativa (reação em cadeia da polimerase). Amostras virais e padrões de RNA são diluídos em série, tratados com um tampão de proteinase K e incubados sob temperaturas controladas para liberar o RNA. O RNA processado é...

Fonte: Dembowski, J. A., et al. Purificação de DNA Viral para a Identificação de Proteínas Virais e Celulares Associadas. J. Vis. Exp. (2017).Este vídeo demonstra o isolamento de complexos proteína–DNA viral de núcleos celulares utilizando química click e purificação com esferas magnéticas. O protocolo envolve a marcação de genomas virais com nucleotídeos modificados com alquino, biotinilação por meio de uma reação click e ligação a esferas magnéticas revestidas com estreptavidina. Após lavagem...

Fonte: Ding, J. et. al., Preparação de rAAV9 para Superexpressar ou Silenciar Genes em Corações de Camundongos. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo mostra a purificação de partículas virais recombinantes a partir de células renais humanas transfectadas. O vírus é liberado por lise por congelamento-descongelamento e purificado utilizando gradientes de iodixanol com filtração assistida por copolímero em bloco.

Fonte: Rghei, A. D., et al. Produção de Vetores de Vírus Associado a Adenovírus em Pilhas de Células para Estudos Pré-clínicos em Modelos Animais de Grande Porte. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra a recuperação do vírus adeno-associado bruto a partir de células de mamíferos transfectadas utilizando lise química e centrifugação, permitindo a produção de AAV com alto rendimento para purificação subsequente e aplicações em terapia gênica pré-clínicas.

Fonte: Lopez Jr., M. A., et al. Detecção e Remoção de Contaminação por Nucleases Durante a Purificação da Integrase do Vírus Espumoso Protótipo Recombinante. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a purificação da integrase viral com marcação de polihistidina utilizando cromatografia de afinidade por níquel. O protocolo utiliza eluição com gradiente de imidazol para isolar seletivamente a integrase com base em sua afinidade pela resina carregada com níquel.

Source: Rustad, M. et al. Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the amplification and recovery of infectious bacteriophages from E. coli cultures. It outlines the steps for plaque isolation, phage replication, controlled lysis, and purification.

Source: Wang, M., et al, Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates intranasal infection of a mouse with a pathogenic influenza virus to establish a respiratory tract infection. The procedure outlines the administration of the virus into the nasal cavity. The virus enters host cells, replicates, and activates the immune system.

Source: Asad, S., et al. Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates antibody-dependent enhancement of Zika virus infection in human primary macrophages, using dengue antibody–virus complexes to model how cross-reactive antibodies facilitate Fcγ receptor–mediated viral entry and replication for studying infection mechanisms and immune interactions.

Source: Klaus, J. P., et al Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment. J. Vis. Exp. (2016).This video demonstrates how to measure arenavirus attachment to monkey kidney cells. The assay uses low temperatures to block endocytosis and isolate the virus binding step. The approach enables precise quantification of surface-bound virus particles under conditions that restrict internalization.

Source: Fernández-Fernández, R., et. al. Bacteriophage Removal from Infected Salmonella Cultures. J. Vis. Exp. (2024)This video demonstrates the use of exogenous LPS (Lipopolysaccharide) as a receptor mimic to inactivate lytic bacteriophages in Salmonella cultures. Through sequential incubation, centrifugation, and washing, phages are eliminated, resulting in a viable, phage-free bacterial suspension for downstream applications.

Fonte: Zhao, J., et al. Silenciamento de microRNA Baseado no Vírus X da Batata (VbMS) em Batata. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demonstra o uso de Agrobacterium tumefaciens para introduzir um construto baseado no Potato Virus X (PVX) em plantas de batata cultivadas in vitro para silenciamento de microRNA baseado em vírus (VbMS). O método permite a supressão sistêmica de um microRNA alvo, permitindo aos pesquisadores estudar seu papel no desenvolvimento da planta por meio de alterações...

Fonte: Esposito, A. M.,et al. Ensaio de Fusão de Membrana Viral Ativado por Cre-Lox de Alto Rendimento para Identificar Inibidores da Fusão de Membrana do HIV-1. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra um ensaio fluorescente de co-cultivo para monitorar a transmissão viral de célula a célula. O ensaio utiliza um cassete repórter de vermelho para verde para visualizar a fusão da membrana viral e avaliar a eficácia de compostos testados na inibição da entrada viral.

Fonte: Yates, J. G. E., et al. Produção de Vírus Recombinante da Doença de Newcastle de Alto Título a Partir de Fluido Alantoico. J. Vis. Exp. (2022)O vídeo demonstra a purificação e concentração de partículas virais a partir de fluido alantoico clarificado coletado de ovos de galinha embrionados infectados com o vírus. Ele apresenta uma série de etapas de filtração e separação, incluindo filtração em profundidade, filtração de fluxo tangencial e ultracentrifugação em gradiente de densidade...

Fonte: Otter, C. J., et al. Infecção de Células Epiteliais Nasais Primárias Cultivadas em uma Interface Ar-Líquido para Caracterizar Interações entre Coronavírus Humano e Hospedeiro. J. Vis. Exp. (2023)Este vídeo demonstra o crescimento do coronavírus em células epiteliais nasais humanas cultivadas em uma interface ar-líquido, simulando a infecção e a replicação viral na cavidade nasal humana.

Source: Zhang, L., et al. Immunofluorescent Labeling of Plant Virus and Insect Vector Proteins in Hemipteran Guts. J. Vis. Exp. (2021)The video demonstrates the preparation of gut tissue from a plant virus–infected insect vector for fluorescence imaging. Fixed guts were washed, permeabilized, and incubated with two fluorescent antibodies in a blocking solution—one targeting a viral antigen in vesicles, the other a vesicle-associated membrane protein. The tissue was counterstained for actin...

Source: Schaeffer, J. W., Chandler, et al. Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates the detection of viruses from bioaerosols using an anion exchange resin. A liquid impinger containing the resin is used to capture viruses from the air. The resin is collected and treated with a virus lysis buffer containing carrier RNA. The lysate is transferred to a microcentrifuge tube for viral RNA isolation, followed by qRT-PCR to amplify...

Source: Yuan, M., et al. A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the process of performing a fluorescent plaque assay using recombinant vaccinia virus encoding red fluorescent protein (RFP) in fibroblast cells, followed by plaque isolation and purification for further analysis.

Source: Williams, S. M. et al. Novel Atomic Force Microscopy Based Biopanning for Isolation of Morphology Specific Reagents against TDP-43 Variants in Amyotrophic Lateral Sclerosis. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates tapping-mode AFM to visualize phage–antigen interactions on a mica surface. It outlines the steps for antigen immobilization, phage binding, and high-resolution nanoscale imaging.

Source: DeMarino, C., et al. Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the separation of EVs from virions and other contaminants by density gradient centrifugation, followed by capture and concentration with hydrogel nanoparticles. Washed fractions are then ready for downstream identification of those enriched in EVs.

Source: Van Lidth de Jeude, J. F., et al. A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the processing of lentivirus-transduced mouse intestinal organoids for paraffin embedding, to enable their downstream analysis for assessing gene expression.

Source: Chen, H. et. al. Live Cell Imaging of the TGF-β/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the preparation of luciferase-expressing breast cancer cells using recombinant adenoviruses for in vivo imaging.

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Source: Stauffer, S. et al. In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the pH-dependent disassembly of influenza A virus (IAV) cores using gradient ultracentrifugation. It outlines glycerol gradient preparation, ultracentrifugation, and how different pH conditions affect IAV core disassembly.

Source: Philip, A. A., et al., Simplified Reverse Genetics Method to Recover Recombinant Rotaviruses Expressing Reporter Proteins. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the isolation of rotavirus double-stranded RNA from clarified cell lysates. It further illustrates the separation and visualization of genome segments through polyacrylamide gel electrophoresis.

Source: Philip, A. A., et. al., Simplified Reverse Genetics Method to Recover Recombinant Rotaviruses Expressing Reporter Proteins. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates a plaque assay technique to monitor rotavirus infection in epithelial cells. Trypsin activation enhances viral entry, and staining highlights viable cells, enabling visualization of infection-induced plaques.

Source: Stauffer, S. et al., In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the effect of pH on the solubilization of influenza A viral cores. Gel electrophoresis and protein staining reveal the progressive disassembly of the core structure under acidic conditions.

Source: Moore, M. D., et al. Alternative In Vitro Methods for the Determination of Viral Capsid Structural Integrity. J. Vis. Exp. (2017)The video demonstrates a protocol for monitoring the heat-induced aggregation of virus-like particles using dynamic light scattering (DLS). It begins with preparing a monodisperse suspension of purified particles. The sample is then loaded into a preheated DLS instrument. As the capsid proteins denature with heat, exposed hydrophobic regions cause particle...

Source: Tran, B. N., et. al. High-throughput Confocal Imaging of Quantum Dot-Conjugated SARS-CoV-2 Spike Trimers to Track Binding and Endocytosis in HEK293T Cells. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the use of quantum dot–conjugated spike protein (QD-Spike) to visualize dose-dependent viral entry in ACE2-GFP–expressing cells. Confocal imaging captures the internalization of QD-Spike via receptor-mediated endocytosis, modeling early coronavirus entry.

Source: Mateer, E., et al., Confocal Imaging of Double-Stranded RNA and Pattern Recognition Receptors in Negative-Sense RNA Virus Infection. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the confocal imaging of viral double-stranded RNA (dsRNA) and cytoplasmic pattern recognition receptors (PRRs) in virus-infected epithelial cells. It highlights how antibody-based fluorescent labeling reveals the interaction between viral replication intermediates and host immune sensors.

Source: Xu, C., et al. An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates the phenotyping of EBV-infected T and NK cell lines using flow cytometry, highlighting the preparation, antibody staining, and analysis steps to identify lineage-specific surface markers. It shows how marker profiles confirm distinct T-cell and NK-cell populations.

Source: Cross, T., et al. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp.(2015)This video demonstrates the isolation of bacteriophages from a soil sample. A soil sample is collected and suspended in a phage buffer and allowed to settle the sediment. The extract is filtered, and nutrients are added. A vacuum filtration is done to remove microbial contaminants. The filtrate with phages is aliquoted into flasks, and...

Source: Allaire, A., et al. Immunofluorescence to Monitor the Cellular Uptake of Human Lactoferrin and its Associated Antiviral Activity Against the Hepatitis C Virus. J. Vis. Exp. (2015).The video demonstrates the procedure for preparing cells to assess the intracellular uptake and activity of an antiviral agent against the hepatitis C virus.

Source: Olety, B., et. al., Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle (GUV) Membranes. J. Vis. Exp. (2016)This study demonstrates a fluorescence-based assay to observe the membrane-binding behavior of human immunodeficiency virus type-1 structural protein. Using synthetic giant unilamellar vesicles as model membranes, the assay visualizes protein recruitment and assembly, mimicking early steps of viral particle formation.

Source: Lê-Bury, G., et al. Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates live confocal imaging of HIV-1-infected human macrophages to visualize and quantify phagosome migration using GFP fluorescence and bright field tracking, providing insights into how HIV alters intracellular trafficking during Fc receptor–mediated phagocytosis.

Fonte: Vacca, O., et al. Uso do Vírus Associado a Adenovírus como Ferramenta para Estudar Barreiras Retinianas em Doenças. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra o procedimento passo a passo para o preparo de crioseções da retina de camundongo, com o objetivo de visualizar a permeabilidade do vírus adeno-associado através de barreiras retinianas rompidas.

Fonte: Vacca, O., et al. Utilização do Vírus Associado a Adenovírus como Ferramenta para Estudar as Barreiras Retinianas na Doença. J. Vis. Exp. (2015).Este vídeo demonstra o método de entrega gênica mediada por AAV na retina de camundongos transgênicos, seguido pelo dissecção do tecido e coloração para avaliar a integridade da membrana limitante interna.

Fonte: Moore, M. D., et al. Métodos Alternativos In Vitro para a Determinação da Integridade Estrutural de Capsídeos Virais. J. Vis. Exp.(2017).Este vídeo demonstra como capsídeos virais purificados são submetidos a tratamento térmico, preparados e visualizados utilizando microscopia eletrônica de transmissão (TEM) para revelar alterações estruturais e danos induzidos pelo calor.

Fonte: Shah, R., et al. Imagem de Fluorescência Multiplexada em Célula Única para Visualizar Ácidos Nucléicos e Proteínas Virais e Monitorar Infecções por HIV, HTLV, HBV, HCV, Vírus Zika e Influenza. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a visualização simultânea de DNA, RNA e proteína do capsídeo do HIV-1 em linfócitos humanos infectados, utilizando hibridização de DNA ramificado e imunofluorescência, permitindo a análise detalhada das etapas da replicação viral em células individuais.

Fonte: Pohl, M. O. & Stertz, S. Medição da Aderência e Internalização do Vírus Influenza A em Células A549 por Citometria de Fluxo. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra o uso de um ensaio de bloqueio com estreptavidina para distinguir o vírus da gripe ligado à superfície daquele internalizado em células epiteliais pulmonares humanas. A comparação dos sinais de fluorescência mostra que uma intensidade mais alta após a incubação indica internalização viral bem-sucedida.

Fonte: Niu, Y. D., et al. Eficácia de Bacteriófagos para o Biocontrole de Patógenos Transmitidos por Alimentos Avaliada por Meio de Configurações de Alto Rendimento. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra um ensaio baseado em microplacas para avaliar a atividade lítica de coquetéis de fagos contra culturas bacterianas de E.coli. Destaca como as alterações na densidade óptica revelam a potência do fago e a concentração necessária para inibição bacteriana...

Fonte: Dembowski, J. A., Deluca, N. A. Purificação de DNA viral para a Identificação de Proteínas Virais e Celulares Associadas. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a infecção de células de mamíferos em fase estacionária com HSV-1 (Vírus do Herpes Simples-1), seguida pela replicação do genoma viral utilizando a maquinaria de replicação do hospedeiro e do próprio vírus. Um análogo sintético de nucleosídeo é incorporado ao DNA viral recém-sintetizado para rotular os genomas em replicação, os...

Fonte: Hiller, T. et. al. Estudo de Vetores Virais em um Modelo de Fígado Tridimensional Repovoado com a Linhagem Celular de Carcinoma Hepatocelular Humano HepG2. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a coloração imunohistoquímica para avaliar a transferência gênica viral em um modelo de fígado de rato recelularizado. A expressão do gene repórter, confirmada pela detecção com anticorpos e co-localização com a coloração nuclear, indica transdução viral bem-sucedida nas células.

Fonte: Bou Khalil, J. Y., et al. Uma Estratégia Rápida para o Isolamento de Novos Faustovírus a Partir de Amostras Ambientais Utilizando Vermamoeba vermiformis. J. Vis. Exp. (2016).Este vídeo demonstra a obtenção de imagens de partículas de faustovírus a partir de um cultivo de ameba infectada utilizando microscopia eletrônica de transmissão. Ele abrange a preparação da grade, coloração negativa com molibdato de amônio para aumentar o contraste e a visualização do vírus ao microscópio. O...

Fonte: Vallery, T. K. & Steitz, J. A. Hibridização Fluorescente In Situ Quantitativa (FISH) e Imunofluorescência (IF) de Produtos Gênicos Específicos em Células Infectadas pelo KSHV. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra a hibridização fluorescente in situ para visualizar RNA viral em células infectadas por vírus. Ele descreve as etapas envolvidas na hibridização da sonda, amplificação do sinal e imagem confocal.

Fonte: Rghei, A. D., et al. Produção de Vetores de Vírus Associado a Adenovírus em Pilhas de Células para Estudos Pré-clínicos em Modelos de Animais de Grande Porte. J. Vis. Exp. (2021)O vídeo demonstra a purificação de vetores virais adeno-associados recombinantes (AAV) a partir de lisado bruto de hospedeiro utilizando uma matriz de afinidade baseada em heparina. Partículas virais se ligam à heparina imobilizada, enquanto as impurezas são removidas por lavagem. Um tampão de alta salinidade...

Source: Rustad, M., et al. Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the synthesis of bacteriophages using a cell-free transcription–translation (TXTL) system. A master mix is prepared using a bacterial crude extract, an energy mix, an amino acid mix, an inhibitor for a DNA-degrading enzyme, and bacteriophage DNA, then incubated. The in vitro molecular machinery enables viral protein expression and DNA...

Source: Jamieson, T. R., et al. Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the procedure for infecting mammalian cells with green fluorescent protein (GFP)-encoding pseudovirus, monitoring viral replication and spread by fluorescence microscopy, and collecting virus-containing supernatant for downstream applications.

Source: Yuan, M., et al. A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the expansion of plaque-derived recombinant virus in adherent mammalian cells. The virus carries a fluorescent reporter in place of a virulent gene, enabling infection tracking. Infected cells are harvested for PCR verification of the genetic modification.

Source: Liu, P., et al. Use of a Recombinant Mosquito Densovirus As a Gene Delivery Vector for the Functional Analysis of Genes in Mosquito Larvae. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the process of isolating recombinant Aedes aegypti densovirus (rAaeDV) from infected mosquito-derived epithelial cells. The infected cells are collected and exposed to repeated freeze-thaw cycles for lysis. Lysate is centrifuged, and the supernatant containing viral particles is filtered, aliquoted, and...

Source: Philip, A. A., et al. Simplified Reverse Genetics Method to Recover Recombinant Rotaviruses Expressing Reporter Proteins. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the recovery of recombinant rotavirus by transfecting plasmids encoding viral genome segments into hamster kidney cells, followed by amplification in monkey epithelial cells, enabling studies of rotavirus biology, replication, and vaccine development.

Source: Prasad, M. et al. In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the in vitro transformation of murine epithelial cells through viral delivery of Cre recombinase and mutation-inducing components. It outlines the steps for Cas9 activation, cancer-gene modification, and the establishment of a tumorigenic murine cell line.

Source: Ehrke-Schulz, E., et al. Cloning and Large-Scale Production of High-Capacity Adenoviral Vectors Based on the Human Adenovirus Type 5. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the large-scale amplification of high-capacity adenoviral vectors in suspension-adapted human embryonic kidney cells expressing Cre recombinase for use in gene delivery applications requiring high-titer, helper-free vector preparations.

Fonte: Chang, X., et al. Preparação de Vírus Pseudotipados da Influenza Aviária H5 pelo Método de Transfecção com Fosfato de Cálcio e Medição da Atividade Neutralizante de Anticorpos. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra a produção de pseudovírus da influenza em células humanas utilizando a transfeção de plasmídeo mediada por fosfato de cálcio, permitindo a geração segura de partículas virais de ciclo único para aplicações posteriores, como ensaios de neutralização de anticorpos em condições...

Fonte: Nishitsuji, H., et al. Desenvolvimento de um Sistema Repórter do Vírus da Hepatite B para Monitorar os Estágios Iniciais do Ciclo de Replicação. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a produção e purificação de partículas recombinantes do vírus da hepatite B, permitindo preparações virais seguras e com deficiência de replicação para o estudo de eventos iniciais de infecção e para aplicações de triagem em larga escala de fármacos antivirais.

Fonte: Liu, P., et al. Uso de um Densovírus Recombinante de Mosquito como Vetor de Entrega Gênica para a Análise Funcional de Genes em Larvas de Mosquito. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra o uso de densovírus recombinantes de mosquito que codificam microRNAs para silenciar genes específicos em larvas de mosquito. Larvas infectadas em estágios iniciais produzem microRNAs funcionais que suprimem a expressão do gene-alvo para estudos posteriores.

Fonte: Eggers, C. H. Manipulação Genética Mediada por Fagos do Espiroqueta da Doença de Lyme Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022).Este vídeo demonstra a transdução de espiroquetas Borrelia geneticamente modificadas utilizando bacteriófagos não infecciosos, precipitados com polietileno glicol, que carregam um plasmídeo de resistência à canamicina. Após a incubação com as bactérias, o cultivo é repicado em meio suplementado com antibiótico. Apenas as células que recebem o plasmídeo...

Fonte: Van Lidth de Jeude, J. F., et al. Protocolo para Transdução com Lentivírus e Análise Subsequente de Organoides Intestinais. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo descreve a transdução lentiviral de organoides intestinais de camundongo a partir de uma estrutura semelhante a criptas contendo suspensão. Utilizando uma matriz de membrana basal como suporte e meios suplementados com fatores de crescimento, vetores lentivirais são introduzidos para permitir a integração estável de...

Fonte: Chen, H., et al.. Imageamento de Células Vivas do TGF-β/Ativação da Via de Sinalização Smad3 In Vitro e In Vivo Utilizando um Sistema Repórter com Adenovírus. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demonstra um método para estudar a ativação da via SMAD em células de câncer de mama utilizando infecção dual por adenovírus. Um vírus veicula um gene GFP expresso constitutivamente, enquanto o outro carrega um repórter RFP sob um promotor sensível à SMAD. Após a estimulação por TGF-beta, as proteínas...

Fonte: Meister, T. L., et al. Um Modelo de Cultura Celular para Produzir Estoques de Vírus da Hepatite E com Alto Título. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demonstra o processo de isolamento de partículas do vírus da hepatite E (HEV) a partir de células de carcinoma hepatocelular humano transfectadas. Partículas virais extracelulares são coletadas de sobrenadantes filtrados, enquanto partículas intracelulares são liberadas submetendo as células a ciclos repetidos de congelamento-descongelamento. O...

Fonte: Rim, Y. A., et al. Geração de Células-Tronco Pluripotentes Induzidas a Partir de Células Sanguíneas Utilizando Vírus Sendai e Centrifugação. J. Vis. Exp. (2016).Este vídeo demonstra a geração de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) a partir de células mononucleares do sangue periférico humano utilizando reprogramação mediada por vírus Sendai. Os fatores de transcrição virais ativam redes de pluripotência e suprimem genes de linhagem, permitindo que um subconjunto de células...

Fonte: Ehrke-Schulz, E., et al. Clonagem e Produção em Grande Escala de Vetores Adenovirais de Alta Capacidade Baseados no Adenovírus Humano Tipo 5. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a purificação de vetores adenovirais de alta capacidade utilizando ultracentrifugação em gradiente de cloreto de césio, permitindo a separação de viriões contendo genoma para aplicações na entrega gênica, caracterização de vetores e estudos terapêuticos...

Fonte: Lu, A., et al. Expressão de Transgene Viral em Corações de Roedores e Avaliação do Risco de Arritmia Cardíaca. J. Vis. Exp. (2022)O vídeo demonstra um método para injeção intramiocárdica guiada por ultrassom de um vetor viral recombinante em um modelo de camundongo. Esta técnica permite a entrega direcionada de genes ao coração para estudar os efeitos da expressão de transgenes na função cardíaca.

Fonte: Hiller, T., et al. Estudo de Vetores Virais em um Modelo de Fígado Tridimensional Repovoado com a Linhagem Celular de Carcinoma Hepatocelular Humano HepG2. J. Vis. Exp., (2016)Este vídeo demonstra a entrega de genes mediada por vírus adeno-associado em um esqueleto de fígado de rato humanizado. O vetor entrega um transgene que codifica um repórter fluorescente e um RNA de silenciamento gênico em células hepáticas por meio de endocitose mediada por receptor. Este modelo permite uma...

Fonte: Kubala, M. H. & DeClerck, Y. A. Silenciamento Condicional da Expressão Gênica em Linhagens de Células Cancerígenas para Estudar o Recrutamento de Monócitos/Macrófagos para o Microambiente Tumoral. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a geração de linhagens celulares tumorais com silenciamento condicional usando um sistema de shRNA lentiviral induzível por Tet. Ele descreve os passos para transdução viral, seleção com antibiótico e silenciamento gênico induzido por doxiciclina.

Fonte: Ding, J., et al. Preparação de rAAV9 para Superexpressão ou Silenciamento de Genes em Corações de Camundongos. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a produção de partículas de vírus adeno-associado recombinante por meio da transfeção de plasmídeos em células de mamíferos. Destaca a expressão coordenada das proteínas Rep, Cap e proteínas auxiliares que promovem a replicação do genoma viral e a montagem do capsídeo no núcleo.

Fonte: McAllister, S. C., Hanson, R. S., et al. Um Modelo In Vitro para o Estudo da Transformação Celular pelo Herpesvírus do Sarcoma de Kaposi J. Vis. Exp.(2017)Este vídeo demonstra a transdução retroviral de células endoteliais primárias com os oncogenes HPV16 E6/E7. Os oncogenes integrados inativam os supressores tumorais p53 e Rb, prolongando a longevidade celular. A seleção com G418 enriquece as células transduzidas, gerando culturas endoteliais imortalizadas adequadas para estudos de...

Fonte: Koza, P., et al. Geração de Ratos Transgênicos utilizando uma Abordagem com Vetor Lentiviral. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a entrega assistida por microinjeção de vetores lentivirais em embriões de rato fertilizados para obter integração estável de transgenes na geração de ratos transgênicos.

Source: Chang, X., et al. Preparation of Pseudo-Typed H5 Avian Influenza Viruses with Calcium Phosphate Transfection Method and Measurement of Antibody Neutralizing Activity. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates a luciferase-based pseudovirus titration assay to determine the optimal target cell density for maximum infection. By comparing luminescence across cell densities, the method ensures high assay sensitivity and reproducibility for downstream applications.

Source: Chang, X., et al. Preparation of Pseudo-Typed H5 Avian Influenza Viruses with Calcium Phosphate Transfection Method and Measurement of Antibody Neutralizing Activity. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates a luciferase-based assay to quantify pseudovirus infection in epithelial cells. The pseudovirus encodes the luciferase gene, which is expressed in infected cells. After washing, and cells are incubated with lysis buffer at an ultra-low temperature, and then thawed to induce lysis.

Source: Klaus, J. P. et al. Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the extraction of viral RNA from surface-bound virions on epithelial cells using silica spin columns. The method includes chemical lysis, RNA stabilization, and membrane-based purification for downstream quantification of virus-cell attachment.

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates the procedure for quantifying Hepatitis C viral RNA using quantitative reverse transcription PCR to measure viral load in infected cell cultures.

Source: Kadoya, S., Sano, D. Assays for the Specific Growth Rate and Cell-binding Ability of Rotavirus. J. Vis. Exp. (2019).This video demonstrates the use of a plaque assay to assess the rotavirus growth curve. The method involves infecting host cells with diluted virus, overlaying with agarose to restrict spread, and staining to visualize plaques formed by viral replication. By counting plaque-forming units at defined time points, the resulting growth curve reveals the lag, exponential, and...

Source: Fout, G. S., Cashdollar, J. L. EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. II. Total Culturable Virus Assay. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the use of a total culturable virus assay to quantify infectious viruses in water samples. It outlines host cell inoculation, observation of cytopathic effect, and statistical quantification of infectious virus concentration.

Source: Scarborough, R. J., et al. Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy. J. Vis. Exp. (2016).This video demonstrates a reverse transcriptase (RT) assay to assess the effect of a test RNA on virus-like particle (VLP) production. Cells are co-transfected with plasmids, and RT activity is measured as a quantitative indicator of VLP output. A decrease in RT activity reflects suppression of viral gene expression by the test RNA.

Source: Manocheewa, S., et al. Pairwise Growth Competition Assay for Determining the Replication Fitness of Human Immunodeficiency Viruses. J. Vis. Exp. (2015)The video demonstrates the procedure for a growth competition assay to measure the relative replication fitness of two viral strains by comparing their replication in human immune cells.

Fonte: Vijayraghavan, S., et al. Protocolo para a Produção de Vetores Lentivirais Deficientes em Integrase para Inativação Gênica Mediada por CRISPR/Cas9 em Células em Divisão. J. Vis. Exp. (2017).Este vídeo demonstra o uso de um ELISA para p24 para estimar os títulos virais de vetores lentivirais. O ensaio envolve a lise de partículas virais para liberar p24, seu aprisionamento com anticorpos específicos e sua detecção por meio de um sistema ligado à peroxidase que produz uma mudança de cor...

Fonte: Krishnamurthi, R., et al. Compreendendo o Impacto dos Bacteriófagos Temperados sobre seus Lisogênicos por meio da Transcriptômica. J. Vis. Exp. (2024).Este vídeo demonstra a enumeração temporal da indução espontânea de fagos em Pseudomonas aeruginosa lisogênica mediante a quantificação de células bacterianas viáveis (UFCs) e partículas de fago infecciosas (UPFs) ao longo do tempo. Ao coletar amostras em intervalos definidos durante o crescimento e analisar tanto a formação de colônias...

Source: Frias-De-Diego and A., Crisci, E. Use of Crystal Violet to Improve Visual Cytopathic Effect-based Reading for Viral Titration using TCID50 Assays. J. Vis. Exp., (2022)This video demonstrates a crystal violet staining method to visualize cytopathic effects in virus-infected cell cultures. The pattern of stained and unstained wells across serial dilutions enables rapid, cost-effective estimation of the viral infectious dose.