Visualização de Nanopartículas do Vírus da Hepatite E por Microscopia Eletrônica de Transmissão

Resumo

Fonte: Chen, C. C., et al. Funcionalização da Superfície de Nanopartículas do Vírus da Hepatite E Utilizando Métodos de Conjugação Química. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra o preparo e a coloração negativa de nanopartículas semelhantes ao vírus da hepatite E para visualização por microscopia eletrônica de transmissão. O método destaca a integridade estrutural de partículas formadas apenas pelo capsídeo autoagregado, confirmando sua uniformidade e pureza por meio de imagens de alta resolução.

Protocolo

1. Observação de nanopartículas do vírus da hepatite E (HEVNPs) utilizando microscopia eletrônica de transmissão (TEM)
   1. Prepare ou dilua as amostras de HEVNP para 0,5 - 2 mg/mL com ácido 2-(N-morfolino)etanosulfônico (MES) 10 mM, pH 6,2, para a obtenção de imagens em TEM.
   2. Ionize as grades revestidas com carbono com descarga de brilho de 40 mA por 30 s para produzir uma superfície de carbono hidrofílica. O equipamento de descarga de brilho é descrito na Tabela de Materiais.
      NOTA: A superfície de carbono hidrofílica das grades dura apenas 30 min após o tratamento com descarga de brilho.
   3. Segure com pinça e adicione 2 µL da amostra de HEVNP à grade, espere de 15 a 30 s e remova o excesso com papel filtro.
   4. Lave imediatamente a grade com ddH₂0 e remova o excesso com papel filtro.
   5. Adicione imediatamente 2 µL de acetato de uranila a 2% à grade, espere 15 s e remova o excesso com papel filtro. Seque as grades da amostra colocando-as em um armário eletrônico desumidificador durante a noite.
   6. Transfira a grade para um microscópio eletrônico de transmissão (TEM) e obtenha imagens com ampliação de 10-80k. As HEVNPs aparecem em TEM como proteínas icosaédricas vazias com diâmetro de aproximadamente 27 nm, devido à ausência de RNA viral.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Hidrato de MES	Sigma-Aldrich Chemical Co	M8250-250G	MES
Ionizador EMS	Electron Microscopy Science		ionizador por descarga de plasma