O rato modelo estase completa de veia cava inferior trombose produz quantidades mensuráveis de tecido veia parede e trombo. Ele tem se mostrado útil para avaliar as interações entre a parede da veia eo trombo oclusivo e na avaliação da progressão de aguda a inflamação crônica.
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Artigo de método
Modelo do mouse completa de Stasis Inferior Trombose da veia cava
Neste artigo
Resumo
Resumo
Tromboembolismo venoso (TEV) inclui tanto a trombose venosa profunda (TVP) e embolia pulmonar (PE). Nos Estados Unidos (EUA), a alta morbidade e mortalidade fazer TEV um problema de saúde 1-2. Depois de doença cardíaca e acidente vascular cerebral, tromboembolismo venoso é a 3 terceira doença mais comum vascular. Em os EUA sozinhos, há um número estimado de 900.000 pessoas afetadas a cada ano, com 300.000 mortes que ocorrem anualmente 3. A confiança in vivo modelo animal para estudar os mecanismos da doença é necessário.
As vantagens de usar o mouse modelo de estase completa de veia cava inferior trombose são várias. O modelo do mouse permite a administração de volumes muito pequenos de agentes de teste limitado de disponibilidade, reduzindo drasticamente os custos. Mais promissor é o potencial de camundongos com nocautes gene que permitem funções específicas do fator inflamatório e coagulação a ser delineados. Atual ensaios moleculares permitem a quantificação da parede da veia, o sangue, trombo todo, e para ensaios de plasma. No entanto, uma das principais preocupações que envolvem este modelo é a restrições de tamanho operatório ea friabilidade dos vasos. Além disso, devido ao pequeno peso da amostra IVC (média 0,005 gramas) é necessário para aumentar o número de animais para análise estatística exata para o tecido, trombo, e exames de sangue, tais como real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, imunoenzimático (ELISA), zimografia parede da veia, e análise de celulares trombo, e sangue total e plasma ensaios 4-8.
A principal desvantagem com o modelo de estase é que a falta de fluxo sanguíneo inibe o efeito máximo da administração sistêmica de agentes terapêuticos sobre o trombo ea parede da veia.
Protocolo
1. Anestesia Procedimentos do mouse
- Os animais são removidos de suas gaiolas e colocados em uma câmara de indução anestésica pré-operatória para a indução de gás em 5% isoflurano e oxigênio a 100%, a uma vazão de 0,5 litros por minuto (vaporizador controlada).
- Os ratos são sedados na câmara de indução anestésica, removido da câmara e do abdômen ventral é raspada com tosquiadeiras elétricas, ou mantidos dentro da câmara se um creme depilatório cabelo é usado (1min).
- Enquanto ainda sob sedação, eles são pesados, os olhos são lubrificados com pomada oftálmica estéril e, em seguida, colocado em um recumbancy dorsal em uma água quente circulando dispositivo de aquecimento sob anestesia geral, com um cone de nariz, usando isoflurano e oxigênio. Neste ponto, a taxa de oxigênio é reduzida para 0,2 litros por minuto.
- O abdômen é pulverizado com solução de clorexidina (diacetato de clorexidina é rapidamente bacterialcidal e persistente) e limpo com gaze estéril ou até três vezes o local da cirurgia está limpo.
2. Rato Micro-cirúrgico e procedimentos de recuperação
- A incisão mediana ventral (2cm) é feita com tesoura de íris através da pele e parede abdominal expondo o abdome. A gaze embebida 2x2in salina estéril é usada para refletir os intestinos para o lado esquerdo do animal. Um limitador do mouse é colocado no lugar permitindo a visualização da veia cava inferior (VCI).
- Neste ponto, um nível de manutenção de isoflurance 2% e taxa de oxigênio a 100% de 0,2 litros / min é utilizado para o restante do procedimento cirúrgico.
- Dissecção romba é facilitada utilizando um cotonete aplicador estéril e extra delicadas meia íris pinça curva. Cuidados devem ser tomados no manuseio do mouse para tecidos que são extremamente frágeis. Ao entrar na cavidade abdominal, use uma gaze embebida 4x4in salina estéril para refletir e exteriorizar os intestinos em uma cortina estéril, permitindo assim a visualização da VCI.
- Todos os ramos de volta IVC, a partir das veias renais até a bifurcação ilíaca, são cauterizados enquanto ramos laterais são ligadas com fio 7-0 suturas não-reativo prolene.
- O IVC é separada da aorta, logo abaixo das veias renais. 7-0 prolene é utilizado para ligadura da VCI.
- O site laparotomia é fechada em uma forma de duas camadas. Nosso laboratório emprega vicryl 5-0, uma sutura sintética, em um padrão contínuo para fechar a parede abdominal. Cola adesivo de pele é usado para fechar a pele. Não há suturas externas para remoção.
- Ratos são então recuperados em uma gaiola de rato individual, observado no pós-operatório (45 minutos a 2 horas), sob uma lâmpada de aquecimento (distância mínima-24 centímetros de distância da gaiola), em seguida, voltaram para suas unidades habitacionais original. Medicação para dor e anti-inflamatórios podem ser usados se não interferir com o objetivo do estudo. Justificação científica de reter medicamentos para a dor, veterinária, e aprovação ICUCA são necessários. Nosso laboratório descobriu que a buprenorfina, 0,05-0,1 mg / kg ² é um analgésico excelente pré-e pós-operatório para os ratos. Além disso, Lidocaína a 4mg/kg (0,4 ml / kg de uma solução a 1%) pode ser infundida no local da incisão, quando analgésicos sistêmicos possam confundir os resultados experimentais.
- Animais Sham de cada grupo experimental submetido a dissecção, utilizados para o tratamento cirúrgico, com exceção do IVC ou qualquer ramos de drenagem não estão ligados ou cauterizados.
- A eutanásia é realizada de acordo com as recomendações estabelecidas pela American Veterinary Medical Association Orientações sobre a eutanásia para roedores.
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Discussão
O Mouse Modelo Completo de Stasis Inferior Trombose da veia cava pode ser executada em várias cepas de ratos de diferentes idades. O modelo é mais adequado para ratos de pelo menos 20 gramas de peso. Este modelo animal de trombose venosa permite que os investigadores a estudar as interações inflamatória entre a parede da veia eo trombo oclusiva venosa. Pela nossa experiência, descobrimos que 10 ou mais animais por grupo são necessários para obter significância estatística entre os grupos para os pesos trombo, parede da ...
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Artigos e Equipamentos | |||
| Gás isoflurano | |||
| Prolene 7-0 sutura | |||
| Fio de vicryl 5-0 | |||
| Cola da pele | |||
| Olho lubrificante | |||
| Nolvasan solução ou solução bacteriostática | |||
| Âmbito estereomicroscópio | |||
| MediCapture | |||
| Aplicadores de algodão | |||
| Gaze 2x2 | |||
| Almofada de aquecimento | |||
| Máquina de anestesia | |||
| Conta de vidro instrumento esterilizador | |||
| Micro instrumentos cirúrgicos | |||
| Limitadores abdominal |
Referências
- Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
- White, R. H., Keenan, C. R. Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism. Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
- Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
- McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis. Thromb Res. 125, 72-78 (2010).
- Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
- Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
- Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
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Reimpressões e permissões
