A fácil, um pot-síntese da N-succinimidyl-4-[ 18 F] fluorobenzoate ([ 18 F] SFB) foi desenvolvido com base em um processo não aquoso radioquímica, em três etapas. Utilizando aquecimento por microondas, todo o procedimento pode ser concluído em menos de 30 min, ou 60 min, com posterior purificação por HPLC preparativa. A decadência corrigida rendimentos radioquímica (RCYs) foram 35-5% (n> 30).
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Artigo de método
Síntese assistida por microondas, um pote de N-Succinimidyl-4-[ 18 F] fluorobenzoate ([ 18 F] SFB)
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Neste artigo
Resumo
Resumo
Biomoléculas, incluindo peptídeos, proteínas 09/01, 10,11 e anticorpos e seus fragmentos de engenharia, 12-14 estão ganhando importância tanto como terapêutica em potencial e agentes de imagem molecular. Nomeadamente, quando marcadas com radioisótopos emissores de pósitrons, (por exemplo, Cu-64, Ga-68 ou F-18), eles podem ser usados como sondas para a imagem latente alvo de muitos processos fisiológicos e patológicos. 15-18 Portanto, esforço significativo tem dedicada à síntese e exploração de 18 F-rotulados biomoléculas. Embora haja exemplos elegante dos 18 F-rotulagem direta de peptídeos, 19-22 condições de reação dura (ou seja, orgânica pH, solvente extrema, alta temperatura) associado com radiofluorination diretos são geralmente incompatíveis com amostras de proteínas frágil. Até o momento, portanto, a incorporação do fármaco grupos prostéticos em biomoléculas continua sendo o método de escolha 23,24.
N-Succinimidyl-4-[18 F] fluorobenzoate ([18 F] SFB), 25-37 um reagente tipo Bolton-Hunter que reage com os grupos amino primários de biomoléculas, é um muito versátil grupo prostético para os 18 F-rotulagem de um amplo espectro de entidades biológicas, em termos de sua evidente estabilidade in vivo e rendimento de radiomarcação alta. Após a marcação com [18 F] SFB, o que resulta [18 F] biomoléculas fluorobenzoylated poderiam ser exploradas como marcadores PET potencial para estudos in vivo de imagens. Most 1 [18 F] radiosyntheses SFB descrito nas literaturas atuais requerem dois ou até três reatores e purificações múltiplas usando extração em fase sólida (SPE) ou cromatografia líquida (HPLC). Tais processos longos dificultam a sua produção de rotina e aplicações difundidas na marcação radioactiva de biomoléculas. Apesar de vários módulo assistida [18 F] sínteses SFB foram relatados, 29-32, 41-42 são baseados principalmente em procedimentos complicados e demorados utilizando caro caixas disponíveis comercialmente radioquímica (Tabela 1). Portanto, uma maior simplificação do radiosynthesis de [18 F] SFB utilizando uma configuração de baixo custo seria muito benéfico para a sua adaptação a um processo automatizado.
Relata-se uma preparação concisa de [18 F] SFB, com base em uma versão simplificada um pot-síntese assistida por microondas, (Figura 1). A nossa abordagem não exige purificação entre as etapas ou qualquer reagentes aquosos. Além disso, a irradiação de microondas, que tem sido usado na síntese de vários marcadores PET, 38-41 pode dá RCYs maior e melhor seletividade do que as reações correspondentes térmica ou eles fornecem rendimentos semelhantes em tempos de reação mais curtos. 38 Mais importante, quando rotulagem biomoléculas , o tempo economizado poderia ser desviado para bioconjugation subseqüente ou passo de imagem PET 28,43 novidade de nosso melhor [18 F] síntese SFB é duplo: (1). estratégia desproteção anidro não requer purificação dos intermediários (s) entre cada etapa e (2) o forno de microondas, transformações radioquímica permitir a produção rápida e confiável de [18 F] SFB.
Protocolo
1. Preparativos iniciais
- Um frasco de V-(5-mL) RV1 (com agitação bar) é usado como vaso de reação principal para a realização de síntese de microondas. Ele é conectado a um adaptador de PEEK com sete entrada / saída portas conecta e colocado dentro da cavidade de microondas (ver figura 2). RV2 está ligado ao cartucho de SPE (I) para recolher o crude [18 F] SFB. RV3 está ligado ao cartucho de SPE (II) para coletar o final [18 F] solução SFB. Ele pode ser colocado em um banho de água quente (40 ° C) para concentrar a solução correspondente antes de reconstituir em tampão PBS, especialmente para a radiomarcação a jusante de biomoléculas.....
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Discussão
Este simplificado de três etapas, um pot-radiosynthesis dos 18 reagente F-acilação [18 F] SFB é desenvolvido com base em não-aquosos química. Este processo tem excelente reprodutibilidade e pode ser usado de forma confiável para a produção de [18 F] SFB em módulos radioquímica automatizada, devido a duas modificações-chave descritas como seguintes: 1. Nós empregamos um passo desproteção / saponificação no sistema KOtBu / DMSO anidro para substituir a solução aquosa de base comuns ou ácid.......
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Divulgações
Este método tem sido submetido a EUA pedido de patente.
Agradecimentos
Este estudo foi financiado pelo Departamento de Energia dos EUA (DE-FG02-09ER09-08 e DE-PS02-09ER09-18), a Jonsson Comprehensive Cancer Center da UCLA, e da Indústria-Universidade Programa Cooperativo de Pesquisa (UC Discovery Grant, bio07 -10665). Agradecemos ao Dr. Nagichettiar Satyamurthy e equipes no Centro de UCLA Cyclotron Biomédica para fornecer o F-18 radioisótopos e discussões perspicaz muitos. Agradecemos a drs. Michael Collins, Greg Leblanc, Joseph Lambert, e Keller Barnhardt de CEM para os seus conselhos e apoio técnico. Agradecemos a Dirk Williams, Darin Williams, os drs. Joseph Lin Hong Dun, e Michael van Dam para peças de design e de usinagem para modi....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | Comentários (opcional) |
| ácido acético em solução aquosa (5%, v / v) | Pescador | A38-500 | Preparado em nosso laboratório |
| Acetonitrila | Sigma-Aldrich | 75-05-8 | |
| Éter etílico | Sigma-Aldrich | 14775 | |
| Dimetilsulfóxido (DMSO) | Sigma-Aldrich | 472301 | |
| Etílico 4 - (N, N, N-trimetilamônio) benzoato triflate | Preparadas em laboratório | ||
| 4,7,13,16,21,24-Hexaoxa-1 ,10-diazabiciclo [8.8.8] hexacosane (K222) | Sigma-Aldrich | 29,111-0 | |
| O - (N-succinimidyl) - N, N, N ', N' tetramethyluronium-tetrafluorborato (TSTU) | Sigma-Aldrich | 105832-38-0 | |
| Carbonato de potássio em solução aquosa (1M) | Sigma-Aldrich | 209619 | Preparado em nosso laboratório |
| Tert-butóxido de potássio | Sigma-Aldrich | 156671 |
Referências
- Okarvi, S. M. Recent progress in fluorine-18 labeled peptide radiopharmaceuticals. Eur. J. Nucl. Med. 28, 929-938 (2001).
- Chen, X. Y., Park, R., Hou, Y. P., Khankaldyyan, V., Gonzales-Gomez, I., Tohme, M., Bading, J. R., Laug, W. E., Conti, P. S.
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Reimpressões e permissões
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