Avaliação do desenvolvimento da glândula mamária e Função em modelos de ratos

Resumo

Este método descreve como dissecar e avaliar o desenvolvimento da glândula mamária e na função de camundongos. Excisadas glândulas mamárias são avaliados quanto ao grau de desenvolvimento usando montar todo, enquanto a ejeção do leite é avaliada através de um ensaio de oxitocina baseado contração mioepiteliais celular.

Resumo

A glândula mamária humana é composta de 15-20 lóbulos que secretam leite em um sistema de abertura de ramificação do ducto no mamilo. Os lobos são eles próprios composto por um número de unidades lobular terminal duto feito de alvéolos secretores e dutos convergentes ^1. Em camundongos, uma arquitetura semelhante é observado na gestação em que ductos e alvéolos são intercalados dentro do estroma do tecido conjuntivo. O mouse epitélio da glândula mamária é uma árvore como sistema de dutos composto de duas camadas de células, uma camada interna de células luminais rodeado por uma camada externa de células mioepiteliais denotada pelos confins de uma membrana basal ^2. Ao nascer, apenas uma árvore ductal rudimentar está presente, composto de um duto de ramos primários e 15-20. Alongamento ramo e começar a amplificação no início da puberdade, em torno de 4 semanas de idade, sob a influência de hormônios ^3,4,5. Às 10 semanas, a maioria do estroma é invadida por um complexo sistema de dutos que passarão por ciclos de ramificação e de regressão em cada ciclo estral até que a gravidez ^2. No início da gravidez, uma segunda fase de desenvolvimento começa, com a proliferação e diferenciação do epitélio de uva para formar estruturas em forma de leite secretoras chamadas alvéolos ^6,7. Após o parto e durante a lactação, o leite é produzido por células secretoras luminal e armazenados dentro do lúmen dos alvéolos. Oxitocina lançamento, estimulada por um reflexo neural induzida pela amamentação dos filhotes, induz as contrações sincronizado das células mioepiteliais em torno dos alvéolos e ao longo dos canais, permitindo que o leite a ser transportado pelos dutos até o mamilo, onde se torna disponível para a ⁸ filhotes. Desenvolvimento da glândula mamária, diferenciação e função estão bem orquestrados e exigem, não só as interações entre o estroma eo epitélio, mas também entre as células mioepiteliais e dentro do epitélio luminal ^9,10,11. Assim, mutações em muitos genes envolvidos nestas interações pode prejudicar tanto o alongamento ductal durante a puberdade ou alvéolos formação durante a gravidez precoce, a diferenciação no final da gravidez e ativação secretória levando a lactação ^12,13. Neste artigo, descrevemos como dissecar as glândulas mamárias do mouse e avaliar o seu desenvolvimento usando monta todo. Também demonstramos como avaliar as contrações mioepiteliais e ejeção do leite através de um ex-vivo ensaio oxitocina baseado funcional. O efeito de uma mutação genética no desenvolvimento da glândula mamária e função pode assim ser determinada in situ através da realização de duas técnicas, em ratos controle mutante e do tipo selvagem.

Protocolo

1. Dissecção da glândula mamária

1. Euthanize o mouse usando CO ₂ por inalação. Evitar o deslocamento cervical, se possível, uma vez que pode danificar os vasos sanguíneos principais no pescoço e resultam em acúmulo de sangue em torno de glândulas mamárias, tornando a dissecção mais difícil. No entanto, se outros critérios devem ser avaliados no mesmo mouse, tais como os níveis sanguíneos de oxitocina, métodos de eutanásia alternativa pode ser necessária, mas isso deve ser avaliado pelo seu IACUC.
2. Em uma espuma de poliestireno envolto em papel alumínio, coloque o mouse sobre as suas costas e se espalhou nos quatro membros. Pin firmemente ....

Discussão

Desenvolvimento da glândula mamária e função são bem orquestrado. Camundongos mutantes podem abrigar mutações genéticas que podem prejudicar o desenvolvimento da glândula mamária e função destacando a necessidade de avaliar a arquitetura da glândula ^13,12. Montagem de todo pode ser realizada como descrito neste artigo em todas as fases de desenvolvimento da glândula mamária. Geralmente, o desenvolvimento do epitélio é avaliado no início da puberdade (~ 4 semanas de idade), no meio da puberdade (~ 6 semanas de.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Reagente	Companhia	Número de catálogo
Carmim	Sigma-Aldrich	C1022
Sulfato de potássio alumínio	Sigma-Aldrich	A6435
Timol	Sigma-Aldrich	T0501
Salicilato de metila	Sigma-Aldrich	M6752
Oxitocina	Sigma-Aldrich	O3251