Extraindo a próstata do sistema urogenital de camundongo: uma técnica para separar a próstata de outros órgãos do sistema urinário e genital em camundongos machos

Todos os procedimentos envolvendo animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. A dissecção do sistema urogenital (UGS)

NOTA: O esquema é apresentado na Figura 1.

1. Eutanasiar um camundongo C57BL/6 macho de 3 meses de idade usando o método de eutanásia inalatória CO₂ ou outra técnica aprovada.
   nota: Camundongos entre 3 e 12 meses de idade podem ser usados com sucesso para o experimento. Camundongos mais velhos (> 6 meses) provavelmente terão mais gordura ao redor do UGS, que precisará ser eliminado. A identificação e separação dos lobos é muitas vezes difícil em camundongos com menos de 3 meses. Outras cepas também podem ser usadas para o experimento.
2. Coloque o rato de costas e prenda as pernas usando alfinetes para que o lado ventral do animal fique exposto.
3. Borrife etanol 70% no abdômen do camundongo e limpe-o.
   nota: Não é necessário raspar os pelos do abdômen antes da dissecção.
4. Levante a pele do abdômen, junto com a camada muscular, com uma pinça média romba e faça uma incisão em forma de Y invertido no abdômen usando uma tesoura.
   1. Primeiro, faça uma incisão reta com uma tesoura afiada logo acima do pênis até o esterno (Figura 2a).
   2. Corte da base da incisão em direção a cada dedo do pé, até as coxas (Figura 2b). Dobre a pele para trás em ambos os lados e na parte inferior para visualizar toda a área abdominal (Figura 2c-e).
      nota: O tamanho do corte varia de acordo com a idade e o tamanho do mouse. O tamanho da incisão reta inicial pode variar de 1,5 a 4 cm, dependendo do tamanho do mouse.
5. Mova-se sobre os outros órgãos para expor o UGS. Levante e mova os intestinos marrom-amarelos (Figura 2f). Pegue as bolsas de gordura abdominal (o tecido esponjoso branco opaco) com uma pinça e mova-as para os lados (Figura 2g).
   nota: A UGS compreende as vesículas seminais, uretra, próstata, ducto deferente (ducto deferente) e bexiga urinária. Pode ser identificado pelo par característico de arcos semicirculares brancos opacos (que são as vesículas seminais), com o saco vesical cheio de líquido preso à base. O tecido translúcido localizado logo abaixo das vesículas seminais é a próstata.
6. Localize o UGS, segure firmemente a bexiga urinária com uma pinça romba e levante todo o UGS para cima do abdômen do camundongo.
   nota: Se a bexiga estiver cheia, drene-a primeiro com uma seringa pequena para proporcionar uma melhor aderência com a pinça e reduzir o risco de ruptura da bexiga.
7. Continuando a puxar a bexiga, deslize uma tesoura por baixo da bexiga e da próstata até a coluna e faça um corte. Corte todas as conexões restantes com a cavidade abdominal (Figura 2h e 2i). Tenha cuidado para não cortar muito perto do UGS para evitar cortes acidentais em qualquer tecido da próstata.
   nota: Ao fazer o corte sob o UGS, a tesoura deve ser inserida até a parte de trás do mouse, para que o corte também encaixe a coluna vertebral. Este método resulta no corte de quase todas as conexões entre o UGS e a cavidade abdominal em um recorte, reduzindo o tempo necessário para extrair o tecido do camundongo.
8. Remova o UGS e coloque-o em 2-6 mL (o suficiente para cobrir o tecido) de solução salina tamponada com fosfato (PBS) ou meio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM, glicose alta) em uma placa de Petri de 6 cm (Figura 2j e 2k) e mova-o para um microscópio de dissecção (aumento de 10X).
   nota: Altere o meio de dissecação conforme necessário nas etapas restantes.

Figura 1: Fluxograma esquemático demonstrando dissecção do sistema urogenital de camundongo e isolamento da próstata. Fluxograma para as etapas do protocolo descritas nas seções 1

Figura 2: Dissecção do UGS do camundongo. Imagens passo a passo da dissecção do UGS de um camundongo de 3 meses de idade: (a e b) fazendo as incisões, (c-e) puxando a pele para trás para expor a área abdominal, (f) deslocando os intestinos, (g) movendo as bolsas de gordura abdominal, (h e i) extraindo o UGS da cavidade abdominal, (j) o UGS extraído, (k) a UGS extraída com os diferentes órgãos e tecidos marcados da seguinte forma: SV (amarelo) = vesículas seminais; P (vermelho) = próstata; F (roxo) = gordura; V (azul claro) = ducto deferente; e B (verde) = bexiga.