Xenoenxerto de tumor da cápsula renal: uma técnica para gerar um modelo animal experimental para avaliar a carcinogênese da próstata

Resumo

Fonte: Nicholson, T. M. et al. Xenoenxerto da cápsula renal e implante subcutâneo de pellets para avaliação da carcinogênese da próstata e hiperplasia prostática benigna. J. Vis. Exp. (2013)

Neste vídeo, demonstramos a implantação de enxertos de tecido de câncer de próstata derivados de humanos na cápsula renal de um camundongo receptor imunocomprometido. Essa técnica pode ser usada para avaliar a progressão do tumor e desenvolver novas estratégias terapêuticas.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Procedimento Cirúrgico: Xenoenxerto da Cápsula Renal

1. Antes da indução da anestesia, observe o camundongo para garantir a saúde e o bem-estar.
2. Coloque o mouse na câmara para indução de anestesia com isoflurano a 3-5%. Quando o animal parar de se mover e a frequência respiratória diminuir, transfira para o cone do nariz em decúbito ventral e mantenha a anestesia em 1-3%.
3. Se necessário, use tesouras para raspar a parte de trás do mouse. Isso não é necessário ao utilizar camundongos nus atímicos (nu/nu).
4. Aplique pressão firme na membrana do retropé estendido para avaliar a adequação da anestesia. Se o camundongo responder à pressão, é necessário mais tempo para que a anestesia faça efeito. Se necessário, ajuste ligeiramente o fluxo da anestesia para obter uma anestesia adequada.
5. Quando o camundongo estiver adequadamente anestesiado, desinfete o local da cirurgia com solução cirúrgica de iodo (Betadine) seguida de álcool a 70%.
6. Use luvas e aventais estéreis; aplique campos estéreis no local da cirurgia. Levante a pele posterior com uma pinça dentada e, usando a tesoura grossa, faça uma incisão na linha média dorsal de 2-3 cm.
7. Usando uma tesoura romba ou uma sonda, separe a derme subjacente da parede corporal (em ambos os lados da incisão para enxerto bilateral ou em um lado para enxerto unilateral).
8. Reposicione o mouse na posição lateral e identifique a localização do rim visualizando o perfil renal através da parede muscular. A aplicação de uma leve pressão manual com o polegar e o indicador no abdômen pode ajudar na visualização dos órgãos internos.
9. Usando uma tesoura de íris fina e tomando cuidado para evitar os principais vasos e nervos espinhais, faça uma incisão de 1 cm na parede do corpo paralela à coluna. Amplie esta incisão para 1,5-2,0 cm (ligeiramente mais longo que o eixo longo do rim) abrindo suavemente a tesoura depois de colocá-la na incisão inicial.
10. Exteriorize o rim aplicando uma leve pressão fora da parede muscular em ambos os lados do rim usando o dedo indicador e o polegar. Coloque as bordas da pele abaixo do rim exteriorizado, que ficará na parede do corpo. Enquanto o rim estiver exteriorizado, mantenha a hidratação da cápsula renal aplicando solução salina estéril.
11. Usando uma pinça fina # 5, levante suavemente a cápsula renal do parênquima do rim e, com um bisturi fino, faça uma incisão de 2-4 mm na cápsula. O tamanho da incisão é determinado pelo tamanho do enxerto, mas deve ser minimizado para manter a integridade da cápsula.
12. Manipule uma pipeta Pasteur de vidro que tenha sido estirada fina e polida com uma extremidade fechada arredondada sob a cápsula tangencial à superfície do rim. Abra suavemente uma pequena bolsa de cápsula para os enxertos, tomando muito cuidado para não danificar o parênquima renal.
13. A borda cortada da cápsula renal é levantada com a pinça fina e o enxerto é inserido na bolsa sob a cápsula usando a pipeta de vidro polido a fogo. Vários enxertos podem ser colocados sob a cápsula renal e espaçados uniformemente na superfície do rim.
14. Se durante o enxertia a cápsula ficar desidratada, ela deve ser umedecida com a aplicação de solução salina estéril.
15. Quando o enxerto estiver completo, levante suavemente os lados da incisão da parede muscular para recolocar o rim de volta na cavidade corporal. Observe que os enxertos não escorregam por baixo da cápsula.
16. Feche a parede muscular com uma única sutura (4-0, sutura de vicryl FS-2). O procedimento cirúrgico pode ser repetido no rim contralateral reposicionando o camundongo.
17. Usando uma pinça dentada, alinhe as bordas da incisão da pele e aplique 2-3 clipes de ferida cirúrgica para fechar a incisão. Administre analgesia (usamos 5-10 mg / kg de carprofeno usando uma injeção subcutânea) e coloque o camundongo na posição de decúbito lateral na gaiola de recuperação. Garanta a manutenção da temperatura corporal com o calor de uma lâmpada ou almofada de aquecimento. Observe a recuperação total do mouse, que deve ocorrer em menos de 15 minutos.
18. Os camundongos devem ser observados nas próximas 24 horas quanto a sinais de dor pós-operatória, sangramento e / ou outras complicações. Inspecione regularmente as incisões cirúrgicas em busca de sinais de infecção.
19. Remova os clipes da ferida com o dispositivo de remoção do clipe da ferida cirúrgica 7 a 14 dias após a cirurgia.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Bata cirúrgica estéril	Fornecimento de veterinários do meio-oeste	350.79866.2
Máscara cirúrgica	Fornecimento de veterinários do meio-oeste	350.50111.2
Luvas estéreis	Kimberly Clark	Rolamento 55092
Clipper de ferida reflexo	F.S.T.	12031-09	Corresponde ao tamanho do clipe enrolado
Sutura Vicryl	Fornecimento de veterinários do meio-oeste	295-92100.2	4-0, FS-2, Absorvível
Tesoura reta afiada / sem corte	Ferramentas Científicas Finas (FST)	14054-13
Pinça Graefe (serrilhada, dentada, curva)	F.S.T.	11055-10
Vaporizador de isoflurano	Supera Anestesia Innov	VAP3000
Câmara de indução	Supera Anestesia Innov	RES644
Pipetas de vidro Pasteur	Fisher Científico	S67050	5" de comprimento
Pinça Graefe (serrilhada, curva)	F.S.T.	11052-10
Pinça Graefe (serrilhada, reta)	F.S.T.	11050-10
Betadine	Webster Veterinária	07-836-3379
Solução salina estéril	Fornecimento de veterinários do meio-oeste	193.74504.3	NaCl 0,9%, injetável
Aplicador de ponta de algodão	Fornecimento de veterinários do meio-oeste	Nº 001.06220.2
Clipes de ferida	Braintree Científico	ACS CS	Pode usar clipes de 7 mm ou 9 mm
Isoflurano	Fornecimento de veterinários do meio-oeste	193.33161.3
Microscópio de dissecação	Leica	L2
Cone de nariz de ratos pequenos	Supera Anestesia Innov	ACC526
Medidor de vazão de oxigênio	Supera Anestesia Innov	OXY660
Removedor de clipes	F.S.T.	12033-00	universal