Xenoenxerto tumoral derivado do paciente: uma técnica para gerar modelo experimental de camundongo para avaliação do carcinoma de células uroteliais

Neste artigo

Resumo

Fonte: Moret, R. et al. Modelos de Xenoenxerto Ortotópico Derivados de Pacientes para Carcinoma de Células Urotheliais Humanas e Crescimento de Tumor de Câncer Colorretal e Metástase Espontânea. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo descreve o procedimento para gerar um modelo murino experimental de xenoenxerto, que pode ser usado para estudar a progressão do carcinoma de células uroteliais.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Modelo de mouse UCC

Preparação de camundongos para procedimento
1. Obtenha camundongos NOD/SCID fêmeas de 6 a 8 semanas de idade. Depile a parte inferior das costas do mouse usando creme depilatório. Anestesiar o camundongo em uma câmara de indução com isoflurano (2,5% em oxigênio a 100%, 1 L / min).
2. Uma vez sedado, coloque o camundongo em decúbito dorsal com o focinho em um cone nasal de isoflurano e sem camisinha firmemente aterrado em um eletrodo dispersivo.
  NOTA: O mouse está completamente sedado se não responder ao beliscão do dedo do pé.
Pegue as células tumorais UCC colhidas e ressuspenda-as em meio RPMI de 50 μL. Instilar as células do CCU na bexiga usando um angiocateter (Figura 1Aa, Ab).
1. Configure uma máquina de eletrocautério monopolar e ajuste-a para uma potência de 4 W. Lubrifique um angiocateter estéril 24 G com geléia lubrificante e insira-o através da uretra do camundongo.
  NOTA: Pode ser sentida uma ligeira resistência. Empurre suavemente para frente ou remova o angiocateter e repita. Não force. Se o cateter dobrar na entrada, insira um fio-guia estéril até a metade do cateter para fornecer estabilidade.
2. Insira totalmente o fio-guia reto de núcleo fixo de 0,025" 1 mm após a extremidade do angiocateter.
  NOTA: O fio é marcado com fita adesiva antes do procedimento para indicar o ponto de parada de 1 mm e garantir a consistência.
3. Segure o pino monopolar no fio-guia por 1 s, permitindo irritação elétrica da mucosa da bexiga.
4. Conecte um angiocateter estéril fresco à seringa Luer-Lok de 1 cc e extraia 200 μL de células coletadas.
  NOTA: Pelo menos 100 μL são perdidos do angiocateter para a seringa. Compensar o volume de perda ao calcular o volume de suspensão celular necessário.
5. Remova o fio-guia e o angiocateter da uretra do camundongo. Insira o angiocateter com seringa de células conectadas à uretra.
  NOTA: O avanço deve ser mais fácil do que antes.
6. Instilar 50 μL de células na bexiga do camundongo. Aguarde alguns segundos antes de remover o angiocateter para permitir que as células adiram à parede da bexiga.
  NOTA: As células permanecem na bexiga e se desenvolvem em um tumor primário.

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Resultados

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Figura 1: Modelos ortotópicos de camundongos UCC. (Aa) Um angiocateter foi inserido na bexiga de um camundongo NOD/SCID fêmea e um choque eletrocautério foi aplicado na parede da bexiga por meio de um fio-guia. (Ab) Células tumorais UCC marcadas com luciferase, BlCaPt15 (2 x 10⁴ células) ou BlCaPt37 (5 x 10⁵ células) com a adição de 3 x 10^5...