Preparação de rim de rato descelularizado: um procedimento para gerar andaime de órgão inteiro vascularizado acelular a partir de um rim de rato colhido

Resumo

Fonte: Kim, E. H. et al. Preparação de Andaimes Renais Descelularizados em Ratos. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo descreve a preparação de um rim de rato descelularizado. O arcabouço vascular acelular obtido pode servir como uma plataforma promissora para a engenharia tecidual de enxertos de órgãos.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Colheita e descelularização renal

1. Colha o rim esquerdo com a aorta abdominal e a veia cava inferior.
2. Ligue o ureter, a aorta torácica, a veia cava superior e os ramos da aorta abdominal.
3. Mantenha o órgão hidratado em PBS de Dulbecco (DPBS) em uma placa de Petri de 10 cm.
4. Canule a aorta abdominal e a veia cava inferior com um cateter 23G. Para remover o sangue residual, conecte a cânula com uma bomba peristáltica e lave com DPBS (500 mL) e 16 U/mL de heparina por 90 min a uma taxa de 5 rpm a 37 °C.
5. Para descelularizar o rim, perfundir o rim com Triton X-100 a 1% (1 L) por 3 h e, em seguida, com solução de dodecil sulfato de sódio (SDS) a 0,75% (2 L) por 6 h a uma pressão constante de 40 mmHg.
   nota: O rim ficará transparente após 8 h.
6. Para remover SDS residual, perfundir a amostra com penicilina a 1% em água destilada (6 L) por 18 h (durante a noite) e depois com DPBS estéril (500 mL) e 16 U/mL de heparina por 90 min.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubulação de polietileno 50, tubulação de cateter de 100 pés	Braintree Científico	0,023" × 0,038"
3-0 Carretel de seda Acesso/ligadura vascular em rato	Braintree Científico	SUT-S 110
Tesouras finas para cortar fáscia/tecido conjuntivo	Ferramentas de Belas Ciências	14058-09
Agulha guia de calibre 25 (para cateteres vasculares)	Becton Dickinson	305145
Pinças vasculares Schwartz microserrefine	Ferramentas de Belas Ciências	18052-01 (em linha reta)
5-0 Carretel de seda Acesso/ligadura vascular em camundongo	Braintree Científico	SUT-S 106