Preparação de Blocos de Esferóides de Câncer por Congelamento Instantâneo: Um Procedimento para Preservar Esferóides de Câncer em Blocos de Matriz Congelada

Resumo

Fonte: Wang, Y. et al. 3-D Sistema de Cultura de Células para Estudo de Invasão e Avaliação de Terapêutica no Câncer de Bexiga. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra a preparação de blocos esferoides cancerígenos por congelamento instantâneo, uma técnica na qual uma amostra de tecido de interesse é congelada a uma temperatura ultrafria, restringindo os esferoides dentro da matriz.

Protocolo

1. Preparação de Bloco de Amostra Contendo Esferóides de Câncer para Seccionamento de Tecido Congelado

1. Levante cuidadosamente o bloco de gel de colágeno e esferóides das lâminas da câmara usando uma pequena pinça. Coloque o bloco de gel de colágeno em um molde de histologia de plástico.
2. Enxágue o gel de colágeno com 1x PBS brevemente e depois fixe-o com paraformaldeído (PFA) a 4% em PBS por 30 min em temperatura ambiente.
   nota: O PFA é um potencial cancerígeno e deve ser manuseado com cuidado.
3. Lave o gel de colágeno com 1,5 mL de 1x PBS em um shaker por 15 min. Substitua o PBS e repita a etapa de lavagem anterior 3x.
4. Aplique uma camada fina (cerca de 3 mm) de composto de temperatura de corte ideal (OCT) para cobrir o fundo de um novo molde de histologia de plástico. Coloque o gel de colágeno fixo e lavado em cima do composto OCT e, em seguida, incorpore cuidadosamente todo o gel, preenchendo o molde com o composto OCT, evitando a formação de bolhas de ar no OCT.
5. Deixe o molde a 4 °C por 1 h.
6. Colocar o molde que contém a amostra e o composto OCT numa placa de Petri de 100 mm flutuante sobre azoto líquido. Deixe a amostra congelar completamente.
7. Armazene o bloco de amostra congelado a -80 °C para uso futuro.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Meio de cultura de células DMEM	Thermo Fisher Científico	11995065
Soro fetal bovino	Thermo Fisher Científico	26140079
Antibiótico-Antimicótico (100x)	Thermo Fisher Científico	15240062
Albumina de soro bovino (BSA)	Sigma-Aldrich	Rolamento A3803
Solução salina tamponada com fosfato (PBS), pH 7,4	Thermo Fisher Científico	10010023
Colágeno tipo 1 de cauda de rato, alto concentração	Corning	354249
Nunc Lab-Tek II com câmara Tampa de lamínula	Thermo Fisher Científico	155382
Solução de paraformaldeído	Ciências da Microscopia Eletrônica	15710
Composto O.C.T	Thermo Fisher Científico	23730571