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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Animal anestesiante
- Use um sistema de anestesia de mesa para anestesiar o animal com isoflurano. Ligue o tanque de O2 e ajuste o medidor de vazão de oxigênio para 1 L/min.
- Coloque um camundongo C57BL/6J fêmea adulta na câmara de indução. Ligue e ajuste o vaporizador de isoflurano a 3% para indução. O camundongo deve estar em anestesia dentro de 2 min. Administre analgésico buprenorfina (0,1 mg/kg) por via subcutânea após a remoção do camundongo da câmara de indução para analgesia preventiva.
nota: Neste protocolo, são utilizados camundongos fêmeas, pois são mais fáceis de trabalhar durante o cateterismo da uretra. O protocolo também funciona para camundongos machos, mas é necessário cuidado extra.
- Aplique pomada oftálmica nos olhos do animal para evitar o ressecamento. Coloque o mouse anestesiado voltado para cima em uma almofada de aquecimento com o nariz no cone do nariz. Gire o interruptor do circuito de ar para deixar o isoflurano passar pelo cone do nariz.
- Contenha a cabeça e o cone do nariz com fita adesiva. Ajuste o vaporizador de isoflurano para 2% para manutenção.
- Contenha os membros com fita adesiva. Faça testes de pinça para garantir que o animal esteja em anestesia profunda e, em seguida, raspe a área abdominal.
2. Depleção de urina e enxágue da bexiga
- Aplique lubrificante no cateter (24G, comprimento de 2,11 cm, diâmetro externo de 0,045 cm) e certifique-se de que sua superfície externa esteja totalmente coberta.
- Insira o cateter na abertura da uretra e empurre-o lentamente até atingir a bexiga, momento em que a urina deve fluir pelo cateter. Pressione suavemente o abdômen para ajudar na depleção da urina.
- Verifique se o cateter está inserido corretamente na bexiga, observando o fluxo automático de saída de urina. Evite perfurar a uretra e a parede da bexiga e aplique lubrificante várias vezes, se necessário.
- Descarte a urina com uma pipeta em um copo de resíduos.
- Pipete 80 μL de solução salina tamponada com fosfato (PBS) na extremidade externa do cateter, com a outra extremidade ainda na bexiga. Conecte cuidadosamente uma seringa de 1 mL ao cateter. Empurre suavemente a seringa para injetar o PBS na bexiga. Deixe um pouco de PBS no cateter para evitar a criação de bolhas de ar na bexiga.
- Remova a seringa. Aguarde o PBS drenar para fora da bexiga. Pressione suavemente o abdômen para evacuar o PBS.
- Descarte o PBS no cateter com uma pipeta no copo de resíduos.
- Repita a lavagem PBS (etapas 2.4 a 2.6) mais duas vezes.
nota: É essencial trabalhar suavemente durante essas etapas de lavagem. Sangue no cateter ou falha no fluxo automático de líquido geralmente indica que a uretra está perfurada