Depleção de urina e enxágue da bexiga em modelo de camundongo: um procedimento baseado em cateter para esvaziar e lavar a bexiga urinária murina

Resumo

Fonte: Yu, C. et al. Novo método de entrega de DNA de plasmídeo ao urotélico da bexiga de camundongo por eletroporação. J. Vis. Exp. (2018)

Neste vídeo, descrevemos um procedimento baseado em cateter para esvaziar e enxaguar a bexiga urinária de um modelo de camundongo. O mouse preparado pode então ser usado para outros procedimentos experimentais.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Animal anestesiante

1. Use um sistema de anestesia de mesa para anestesiar o animal com isoflurano. Ligue o tanque de O₂ e ajuste o medidor de vazão de oxigênio para 1 L/min.
2. Coloque um camundongo C57BL/6J fêmea adulta na câmara de indução. Ligue e ajuste o vaporizador de isoflurano a 3% para indução. O camundongo deve estar em anestesia dentro de 2 min. Administre analgésico buprenorfina (0,1 mg/kg) por via subcutânea após a remoção do camundongo da câmara de indução para analgesia preventiva.
   nota: Neste protocolo, são utilizados camundongos fêmeas, pois são mais fáceis de trabalhar durante o cateterismo da uretra. O protocolo também funciona para camundongos machos, mas é necessário cuidado extra.
3. Aplique pomada oftálmica nos olhos do animal para evitar o ressecamento. Coloque o mouse anestesiado voltado para cima em uma almofada de aquecimento com o nariz no cone do nariz. Gire o interruptor do circuito de ar para deixar o isoflurano passar pelo cone do nariz.
4. Contenha a cabeça e o cone do nariz com fita adesiva. Ajuste o vaporizador de isoflurano para 2% para manutenção.
5. Contenha os membros com fita adesiva. Faça testes de pinça para garantir que o animal esteja em anestesia profunda e, em seguida, raspe a área abdominal.

2. Depleção de urina e enxágue da bexiga

1. Aplique lubrificante no cateter (24G, comprimento de 2,11 cm, diâmetro externo de 0,045 cm) e certifique-se de que sua superfície externa esteja totalmente coberta.
2. Insira o cateter na abertura da uretra e empurre-o lentamente até atingir a bexiga, momento em que a urina deve fluir pelo cateter. Pressione suavemente o abdômen para ajudar na depleção da urina.
   1. Verifique se o cateter está inserido corretamente na bexiga, observando o fluxo automático de saída de urina. Evite perfurar a uretra e a parede da bexiga e aplique lubrificante várias vezes, se necessário.
3. Descarte a urina com uma pipeta em um copo de resíduos.
4. Pipete 80 μL de solução salina tamponada com fosfato (PBS) na extremidade externa do cateter, com a outra extremidade ainda na bexiga. Conecte cuidadosamente uma seringa de 1 mL ao cateter. Empurre suavemente a seringa para injetar o PBS na bexiga. Deixe um pouco de PBS no cateter para evitar a criação de bolhas de ar na bexiga.
5. Remova a seringa. Aguarde o PBS drenar para fora da bexiga. Pressione suavemente o abdômen para evacuar o PBS.
6. Descarte o PBS no cateter com uma pipeta no copo de resíduos.
7. Repita a lavagem PBS (etapas 2.4 a 2.6) mais duas vezes.
   nota: É essencial trabalhar suavemente durante essas etapas de lavagem. Sangue no cateter ou falha no fluxo automático de líquido geralmente indica que a uretra está perfurada

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Seringa BD 1mL TB	pescador	148232E
Cateteres Safelet I.V. Descartáveis Exel International	Fisher Científico	Telefone: 14-841-21	24G, 2,11 cm de comprimento, 0,045 cm de diâmetro externo
Tapete de Descanso Aquecido K&H para Pequenos Animais, 9 Por 12 Polegadas	amazona		Cubra o tapete térmico com toalhas de papel
Pomada oftálmica	pescador	NC0849514
PBS, pH 7,4	Tecnologias da Vida	10010049
Ponteiras de pipeta 200 μL	EUA Científico	1111-0206
Pomada oftálmica	pescador	NC0849514
Pontas de pipeta, encaixe universal; 0,1 a 10 μL	pescador	02707438(CS)
Buprenorfina	sigma	B9275-50MG
PIPETMAN NEO P2	Gilson	F144561
PIPETMAN NEO P200N	Gilson	F144565
Lubrificante veterinário Therio-gel	Saúde animal PBS	353-736
V-1 Sistema de anestesia de mesa	VetEquip	901806
Isoflurano	Veterinário um	501017
Fita, Scotch	pescador	19047257