Coloração com ácido periódico de Schiff ou PAS: um método para avaliar as deformidades estruturais do glomérulo

1. Coloração de Schiff com ácido periódico (PAS)

NOTA: A coloração PAS destacará as membranas basais das alças capilares glomerulares e o epitélio tubular. Ele permite a visualização detalhada das células glomerulares, matriz mesangial e expansão potencial e possíveis alterações do GBM (ou seja, espessamento e irregularidades).

1. Corte o córtex renal fixado em parafina e fixado em PFA usando um micrótomo de 5 μm de espessura em lâminas revestidas de poli-L-lisina. Secar a 37 °C durante 1 h. Certifique-se de que a seção não contenha dobras ou orifícios, o que pode distorcer a morfologia sob o microscópio.
2. Desparafinize as lâminas incubando duas vezes em xileno (CUIDADO, irritante; use em gabinete de exaustão) por 3 min cada, duas vezes em 100% EtOH por 3 min cada e depois uma vez em 95%, 70% e 50% EtOH por 3 min cada, tudo em temperatura ambiente. Reidratar as lâminas em dH₂O.
3. Incubar as lâminas em solução ácida periódica (CUIDADO, irritante; utilizar em câmara de exaustão) (1 g/dL) durante 5 min e, em seguida, enxaguar as lâminas em várias mudanças de dH₂O. Utilizar um recipiente com 100 ml dH₂O à temperatura ambiente.
4. Incubar as lâminas no reagente de Schiff (Parasoanilina HCl 6 g/L e metabissulfito de sódio 4% em HCl 0,25 mol/L) por 15 min em temperatura ambiente. Lave as lâminas em água corrente da torneira por 5 min.
5. Contra-core com hematoxilina por 3 s antes de enxaguar bem as lâminas em água corrente da torneira por 15 min.
   nota: Alguma otimização pode ser necessária para determinar o momento ideal para a coloração de hematoxilina.
6. Desidratar as lâminas usando o inverso do protocolo de desparafinização. Finalize com xileno.
7. Seque as lâminas ao ar e monte com mídia de montagem à base de xileno.
8. Imagem em microscópio óptico com ampliação de 400X para avaliação de estruturas glomerulares. Avalie o seguinte: espessamento e irregularidades do GBM, colapso das alças capilares, tecido fibrótico, esclerose, proliferação celular (endotelial, podócito e mesangial, ou células inflamatórias infiltrando o tufo).
   nota: Para uma avaliação abrangente da fisiopatologia glomerular, lesões em outras partes do rim devem ser avaliadas, como nos túbulos.