Criopreservação de cérebro murino por congelamento instantâneo: uma técnica para congelar rapidamente espécimes de cérebro de camundongos inteiros para análise histológica

Resumo

Fonte: Comba, A. et al. Microdissecção de captura a laser de sub-regiões de glioma para caracterização espacial e molecular de heterogeneidade intratumoral, oncostreams e invasão. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo demonstra a criopreservação do cérebro de um camundongo para isolar áreas anatômicas discretas ou populações de células específicas dos tecidos tumorais. Esta técnica é fundamental para obter a resolução óptica ideal da morfologia do tecido cerebral para análise subsequente.

Protocolo

1. Criopreservação de cérebros que abrigam tumores de glioma

1. Antes de criopreservar os cérebros, prepare um frasco cheio de isopentano / 2-metilbutano frio e coloque-o em um recipiente cheio de nitrogênio líquido. Deixe o solvente esfriar.
2. Remova o cérebro da solução de sacarose a 30% e seque-o em um papel de filtro.
3. Rotule o criomold com um marcador permanente. Adicione cuidadosamente aproximadamente 5 mL de OCT (composto de temperatura de corte ideal) no centro do criomold, evitando bolhas de ar.
4. Coloque o cérebro em um criomoldor contendo OCT na orientação desejada. Preencha o molde com OCT até que o cérebro esteja totalmente submerso. Usando uma pinça limpa, coloque rapidamente o criomold com OCT e o cérebro no isopentano / 2-metilbutano frio.
5. Assim que a OCT solidificar (~ 30–40 s), remova o criomold com o cérebro e coloque-o em gelo seco. Não deixe o molde contendo o cérebro em 2-metilbutano após 2 minutos, pois isso pode causar rachaduras na OCT sólida. Enrole o criomoldor com o cérebro em papel alumínio e armazene-o a -80 °C.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Peel Away Descartáveis Moldes de Incorporação	Ciências da Microscopia Eletrônica	Rolamento 70182
Criostato de Pesquisa	Leica	CM3050s
Composto Tissue-Plus OCT	Fisher Científico	Telefone: 23-730-571