Seccionamento de tecido cerebral de camundongo congelado: um procedimento para obter seções finas de tecido congelado de tecido cerebral murino congelado

Resumo

Fonte: Comba, A. et al. Microdissecção de captura a laser de sub-regiões de glioma para caracterização espacial e molecular de heterogeneidade intratumoral, oncostreams e invasão. J. Vis. Exp. (2020)

Neste vídeo, demonstramos o seccionamento de um tecido tumoral cerebral de camundongo congelado usando um criostato. As seções de tecido cerebral congeladas assim obtidas são armazenadas em baixas temperaturas até uma análise posterior.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Seccionamento de tecidos de tumores cerebrais congelados

1. Rotular lâminas de naftalato de polietileno (PEN) de 2 μm com as informações da amostra. As seções de tecido serão colocadas diretamente nessas lâminas após o seccionamento.
2. Defina a temperatura da câmara do criostato entre -20 a -24 °C. Antes de seccionar, coloque o bloco de amostra na câmara do criostato e deixe-o equilibrar a temperatura na câmara por 30 a 60 min.
3. Limpe a câmara do criostato e o porta-faca com etanol 100% e borrife as escovas a serem usadas com a solução de limpeza RNase. Trabalhando dentro da câmara do criostato, remova o molde e prenda o bloco OCT contendo o cérebro ao disco da amostra do criostato com OCT. Coloque o bloco no suporte do disco e alinhe o bloco com a lâmina da faca.
4. Instale uma lâmina descartável no suporte de seccionamento.
5. Corte o cérebro com 10 μm de espessura. Certifique-se de que não haja riscos ou linhas de arranhões no tecido. Usando um pincel, alise e desenrole cuidadosamente o tecido na superfície de corte.
6. Monte cuidadosamente o tecido que contém as seções cerebrais em lâminas de vidro PEN sem RNase. Vire as lâminas de vidro carregadas positivamente com os dedos na direção do tecido e pressione suavemente a lâmina de vidro para baixo em direção à seção de tecido.
   nota: A temperatura das mãos ajudará o tecido a se prender ao vidro.
7. Depois de montar as seções cerebrais nas lâminas, mantenha as lâminas em uma caixa dentro da câmara do criostato e armazene-as a -80 °C. Nunca mantenha as lâminas em temperatura ambiente.
   nota: Dobramento do tecido e rasgo são comuns. Para uma análise posterior precisa, é importante minimizar esses artefatos.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Lâmina de vidro de membrana PEN (2 μm)	Lieca	1150518
Criostato de Pesquisa	Leica	CM3050s
Solução de descontaminação RNaseZap RNase	Fisher Científico	AM9780
Peel Away Descartáveis Moldes de Incorporação	Ciências da Microscopia Eletrônica	Rolamento 70182
Solução pontual	Pesquisa Zymo	D3001-1
Composto Tissue-Plus OCT	Fisher Científico	Telefone: 23-730-571