Isolamento de células mononucleares do cérebro de camundongos: uma técnica de centrifugação por gradiente de densidade para isolar células mononucleares residentes no cérebro

Abstract

Fonte: Ji, Z. et al. Análise Citométrica de Fluxo da Infiltração de Linfócitos no Sistema Nervoso Central durante a Encefalomielite Autoimune Experimental. J. Vis. Exp. (2020)

Neste vídeo, realizamos o isolamento de células mononucleares do cérebro de um camundongo usando centrifugação por gradiente de densidade. A suspensão isolada de células mononucleares pode ser usada para análises posteriores a jusante.

Protocol

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação de suspensão de célula única do cérebro

1. Dilua o meio de gradiente de densidade na proporção de 9:1 com PBS em um tubo cônico de 15 mL para obter uma solução final de 100%.
2. Anestesiar camundongos no pico da EAE com uma injeção intraperitoneal de pentobarbital sódico a 1% (50 mg / kg) e perfundir intracardiologicamente com 20 mL de PBS estéril gelado. Consiga isso injetando lenta e firmemente PBS no ventrículo esquerdo do cora....

Results

Figura 1: Esquema da configuração do gradiente de Percoll para isolamento de células mononucleares.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Homogeneizador Dounce	Wheaton	353107542
Percoll	Ge	17-0891-01