Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Preparação pré-operatória geral
- Jejue os camundongos por 6 h antes da cirurgia. O alimento dietético em gel foi administrado 3 dias antes da cirurgia e exclusivamente um dia antes da cirurgia. Induzir anestesia em uma câmara com isoflurano a 5% (0,4 L/min) e O2 (dioxigênio; 0,4 L/min). Realize um teste de pinça do dedo do pé para confirmar se a anestesia é eficaz. Administre analgésicos (0,1 mg/kg de buprenorfina), antibióticos (10 mg/kg de marbofloxacina) e pró-cinéticos (1 mg/kg de metoclopramida) por meio de injeções subcutâneas.
- Alocar uma área de trabalho específica para procedimentos cirúrgicos (distante do tráfego do laboratório e ventiladores). Limpe a área cirúrgica com desinfetantes de superfícies duras dedicados. Coloque uma almofada de aquecimento na área do espaço de trabalho para manter a homeotermia do rato durante a cirurgia. Aplique uma almofada limpa e absorvente sobre a almofada de aquecimento.
- Depile o abdômen do esterno à pélvis usando um barbeador elétrico. Enrole o abdômen do mouse em filme plástico esterilizado (Figura 1A) e coloque o mouse em decúbito dorsal na almofada de aquecimento.
- Aplique pomada veterinária nos olhos para evitar o ressecamento durante a anestesia. Coloque o camundongo no cone do nariz e mantenha a anestesia com isoflurano a 2% (0,4 L / min) e O2 (0,4 L / min).
- Antes de iniciar a cirurgia, coloque um avental de exame estéril, uma touca descartável, uma máscara facial e luvas estéreis. Abra uma embalagem autoclavada contendo um conjunto de instrumentos cirúrgicos esterilizados, que é necessário para todas as etapas da cirurgia. Corte uma janela no filme plástico esterilizado e desinfete a pele com 2 soluções sucessivas de iodopovidona.
2. Bypass gástrico em Y de Roux: procedimento cirúrgico
- Laparotomia mediana
- Sob um microscópio binocular e com um bisturi, faça uma incisão na linha média do esterno até o meio do abdômen para abrir a cavidade abdominal (não danifique os músculos abdominais). Proteja a pele com uma compressa estéril embebida em solução salina a 37 °C (Figura 1B).
- Membro biliopancreático e membro alimentar
- Externalize o intestino (Figura 1C). Meça 8 cm do piloro e faça duas ligaduras do intestino com suturas inabsorvíveis 5.0 (Figura 1D).
- Corte o intestino entre as duas ligaduras (Figura 1E). Coloque o membro proximal das duas extremidades no quadrante superior esquerdo do abdômen. Nota: Este será usado como o membro alimentar (Figura 1F).
- Posicionar o ramo distal das duas extremidades voltado para o ramo alimentar 6 cm abaixo do ramo proximal (Figura 1F).
nota: Isso será usado como o membro biliar.
- Jejuno-jejunostomia
- Corte o membro proximal e a alça intestinal usando uma microtesoura e faça duas incisões antimesentéricas do mesmo comprimento (Figura 1G e 1H).
- Realizar anastomose lado a lado com dois pontos inabsorvíveis 8.0. Realize primeiro a anastomose do lado dorsal (Figura 1I), seguida da anastomose do lado ventral (Figura 1J).
- Role suavemente 2 cotonetes umedecidos em cada lado da anastomose para garantir que a sutura seja à prova de vazamentos. Completo com suturas 8.0 não absorvíveis em caso de vazamento.
- Gastrojejunostomia
- Mobilize suavemente o estômago usando cotonetes umedecidos. Liberte o estômago de suas inserções laterais de tecido conjuntivo usando cotonetes umedecidos ou microtesouras.
- Delicadamente, exteriorize totalmente o estômago, colocando uma compressa de colágeno hemostático reabsorvível atrás do estômago. Realizar ligadura do piloro com sutura inabsorvível 5.0 passada pelo omento com micropinça curva (Figura 1K e 1L).
- Corte o lado ventral do estômago, a 1,5 cm do piloro, e o membro distal usando uma microtesoura, criando duas incisões do mesmo comprimento (Figura 1M).
- Realizar anastomose lado a lado com dois pontos inabsorvíveis 8.0. Comece com a anastomose do lado dorsal (Figura 1N) e, em seguida, execute a anastomose do lado ventral (Figura 1O). Enrole suavemente 2 cotonetes umedecidos em cada lado da anastomose para garantir que a sutura seja à prova de vazamentos. Completo com suturas 8.0 não absorvíveis em caso de vazamento.
- Fechamento abdominal
- Fechar a camada muscular da parede abdominal com pontos inabsorvíveis 5.0 (Figura 1P). Reduza a anestesia reduzindo a concentração de isoflurano para 1%. Feche a pele com suturas inabsorvíveis 5.0 (Figura 1Q). Administre 25 mL/kg de solução salina morna por injeção subcutânea.
3. Cuidados Gerais Pós-Operatórios
- Pare o isoflurano e continue com um fluxo de O2 de 0,8 L / min até que o mouse esteja totalmente acordado. Não deixe o rato sozinho até que ele recupere o controle motor, indicado pelo animal começando a se mover pela gaiola e sendo capaz de ficar de pé e andar sem cair.
- Coloque o camundongo (apenas um camundongo por gaiola) em uma incubadora sob condição de temperatura de 30 ° C por 5 dias.
- Manter a suplementação de ferro (0,5 mg/kg/dia; injeção subcutânea) e vitamínica (800 mg/180 mL em água) nos camundongos RYGB até o final do protocolo.
- Devolva o acesso gratuito a alimentos dietéticos em gel (dieta em gel com alto teor de gordura: 10% banha, 10% açúcar líquido, 57% água) por 5 dias após a cirurgia. Reintroduzir uma dieta sólida 3 dias após a cirurgia.
- Injete por via subcutânea buprenorfina (0,1 mg/kg, duas vezes ao dia, do dia 0 ao dia 3 após a cirurgia), meloxicam (1 mg/kg, do dia 0 ao dia 3 após a cirurgia), metoclopramida (1 mg/kg, do dia 0 ao dia 5 após a cirurgia) e marbofloxacina (10 mg/kg, do dia 0 ao dia 3 após a cirurgia)
