Inativação do gene alvo baseada no sistema CreER-LoxP: um sistema Cre Recombinase induzível por tamoxifeno para nocaute do gene alvo em um modelo de camundongo

Resumo

Fonte: Hübner, E. K., et al. Sistemas Constitutivos e Induzíveis para Modificação Genética In Vivo de Hepatócitos de Camundongos Usando Injeção Hidrodinâmica de Veias da Cauda.J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo descreve um procedimento para nocaute do gene alvo usando um sistema de cre-recombinase induzível por tamoxifeno após injeção intraperitoneal de tamoxifeno em um modelo de camundongo.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Indução de CreER Transfectado com Tamoxifeno

CUIDADO: O tamoxifeno é prejudicial, pode ser cancerígeno ou prejudicar a fertilidade. Consulte a ficha de dados de segurança.

1. Planeje injeções intraperitoneais de tamoxifeno em três dias consecutivos.
2. No dia 1, dissolva 10 mg de tamoxifeno em 40 μL de etanol. Incubar a 55 °C durante 10 min. Vortex várias vezes até que o tamoxifeno se dissolva.
3. Adicione 960 μL de óleo de milho. Incube por 5 minutos a 55 °C. Vortex várias vezes para obter uma solução límpida.
4. Prepare a solução em uma seringa de insulina de 1 ml com uma agulha de 27 G.
5. Raspe o mouse agarrando o pescoço do mouse cuidadosamente com o polegar e o segundo dedo, fixando a cauda entre a base da mão e o quarto e o quinto dedo.
6. Injete 0,1 mL (= 1 mg de tamoxifeno) da solução por via intraperitoneal no quadrante inferior esquerdo do abdômen.
7. Repita as injeções nos dias dois e três.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Injekt Seringa F 1 ml	Braun	Rolamento 9166017V	Para injeção intraperitoneal
Tamoxifeno	Sigma-Aldrich	T5648-1G	Para ativação do CreER
Óleo de milho	Sigma-Aldrich	C8267-500ML	Transportador para injeções de tamoxifeno