Técnicas de Edição Genômica

Este vídeo explica o conceito de editores de base de citosina mediados por CRISPR para induzir a substituição de nucleotídeos direcionados.

Neste vídeo, demonstramos a edição completa do genoma baseada em CRISPR-Cas9 em células cultivadas, onde Cas9 e sgRNA são fornecidos como uma única construção de plasmídeo para as células. O sistema CRISPR-Cas9 e o gene desejado a ser inserido foram introduzidos nas células por meio da técnica de eletroporação para facilitar a edição gênica bem-sucedida.

Este vídeo demonstra uma técnica de edição de genoma baseada em nuclease de dedo de zinco em células-tronco pluripotentes humanas (hPSCs). Como as hPSCs podem ser potencialmente diferenciadas em vários tipos de células, essa tecnologia é útil para estudos patológicos e farmacológicos in vitro de maneira específica do paciente.

Este vídeo descreve uma técnica precisa de edição de genoma em células-tronco pluripotentes induzidas por humanos, ou hiPSCs, usando TALENs para criar quebras de fita dupla em um locus direcionado, induzindo reparo direcionado por homologia para integração de genes de proteínas de fluorescência.

Neste vídeo, demonstramos a integração de transgenes específicos do local mediada por phiC31 no embrião de Anopheles por meio de microinjeção. Este método ajuda a introduzir os genes desejados em um sistema hospedeiro para pesquisa e aplicações industriais.

Neste vídeo, demonstramos a geração de plantas transgênicas de Arabidopsis expressando transgene estável por meio da transformação gênica baseada em cromossomos artificiais bacterianos binários mediada por Agrobacterium.

Neste vídeo, demonstramos um procedimento para gerar uma linha transgênica estável de peixe-zebra expressando constitutivamente uma proteína indicadora de voltagem fluorescente após a co-injeção do sistema de transposons Tol2 compreendendo a construção de mRNA de transposase e transon Tol2 que codifica o indicador de voltagem fluorescente.

Este vídeo demonstra o procedimento para gerar neurônios motores por transfecção de iPSCs humanas com sistema de transposons PiggyBac pela expressão ectópica de fatores de transcrição específicos da linhagem.

Este vídeo demonstra um silenciamento de genes baseado em interferência CRISPR em Leptospira patogênica. A repressão direcionada da expressão gênica usando um sistema CRISPR/Cas que bloqueia a formação de mRNA ajuda a identificar genes candidatos para estudos patológicos e farmacológicos.

Este vídeo descreve um procedimento para nocaute do gene alvo usando um sistema de cre-recombinase induzível por tamoxifeno após injeção intraperitoneal de tamoxifeno em um modelo de camundongo.

Este vídeo descreve uma técnica de nocaute genético usando um concatemer CRISPR para nocautear simultaneamente vários genes em células organoides intestinais de camundongos cultivadas. Este método é usado para nocautear um gene doente e elucidar a função de um gene e seus parálogos.

Neste vídeo, demonstramos um método para realizar a transdução de vetores lentivirais shRNA para obter linhagens celulares knockdown estáveis em células-tronco hematopoiéticas e progenitoras imortalizadas (iHSPCs).

Este vídeo demonstra o sistema de expressão gênica da tetraciclina, ou Tet-On, em um modelo de camundongo. Na presença de doxiciclina, um derivado da tetraciclina, o sistema Tet-On que consiste na proteína transativadora reversa controlada por tetraciclina é ativado e expressa o gene de interesse.

Neste vídeo, descrevemos um procedimento para realizar a transfecção reversa de siRNA em adipócitos para modular a expressão de uma proteína alvo.

Este vídeo descreve o método de regulação da expressão gênica em células cultivadas por transfecção com um plasmídeo contendo um gene de interesse e um plasmídeo regulador. A expressão deste plasmídeo pode ser controlada pela tetraciclina ou seus análogos sintéticos, tornando este sistema um modelo útil para estudar a expressão gênica regulável.

Este vídeo descreve uma técnica de knockdown de genes usando morfolinos de bloqueio translacional microinjetados no estágio de uma célula do peixe das cavernas. Os morfolinos são oligonucleotídeos de DNA que se ligam à sequência complementar do mRNA alvo e bloqueiam sua tradução em uma proteína. Consequentemente, os morfolinos são usados como ferramentas moleculares para interromper ou reduzir a expressão de um gene transitoriamente.