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Transformação gênica baseada em vetor cromossômico artificial bacteriano binário em plantas de Arabidopsis: uma técnica para gerar plantas transgênicas com inserção de cópia única

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Tark-Dame, M., et al. Gerando plantas transgênicas com inserções de cópia única usando vetor binário BIBAC-GW. J. Vis. Exp. (2018).

Neste vídeo, demonstramos a geração de plantas transgênicas de Arabidopsis expressando transgene estável por meio da transformação gênica baseada em cromossomos artificiais bacterianos binários mediada por Agrobacterium.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Arabidopsis Transformação

  1. Prepare as plantas de Arabidopsis para a transformação.
    1. Cultive plantas Arabidopsis em uma estufa ou câmara de crescimento climatizada até que estejam florescendo (12 vasos com 9 plantas cada por imersão).
    2. Prenda os primeiros parafusos para permitir que mais parafusos secundários surjam. As plantas estão prontas para mergulhar 4–6 dias após o corte, quando as plantas têm muitas cabeças de flores imaturas e poucas sílicas fertilizadas.
  2. Imersão floral
    1. Mergulhe as inflorescências por 5 a 10 segundos em suspensão de Agrobacte....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Figura 1: Bandeja preenchida com mudas de Arabidopsis antes e após o tratamento com glufosinato-amônio. As plântulas que não expressam o gene bar que está presente no t-DNA pBIBAC-BAR-GW morrem após serem pulverizadas com solução de glufosinato-amônio. As fotos mostram a mesma bandeja de mudas (A) antes da pulverização com Glufosinato-amônio, 14 dias após a semeadura, e (B) 10 dias depois, a.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Não há conflitos de interesse declarados.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Sulfato de canamicina monohidratadoDuchefaK0126
Mistura enzimática de clonase LR Gateway Thermo Scientific - Invitrogen11791-019
Murashige Skoog médioDuchefaM0221
ÁgarBdRolamento 214010
Glufosinato-amónio (Basta)Bayer79391781
Gerador de imagens de fósforoCiências da Vida da GE HealthcareTufão FLA 7000
filme plástico (envoltório de Saran)Omnilabo1090681
agaroseThermo Scientific - Invitrogen16500

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Tags

Binary Bacterial Artificial ChromosomeAgrobacterium mediated TransformationArabidopsis PlantsSingle copy InsertionFloral Dipping TechniqueFluorescence MicroscopyHerbicide Resistance ScreeningGenomic DNA ExtractionPCR AnalysisSeed specific Promoter

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