Focalização isoelétrica em fase líquida: uma técnica de eletroforese para separar moléculas bioativas do extrato bruto de Gymnema sylvestre

Neste artigo

Resumo

Fonte: Veerapandian, R., et al. Separação de Pequenas Moléculas Bioativas, Peptídeos de Fontes Naturais e Proteínas de Micróbios pelo Método de Focalização Isoelétrica Preparativa (IEF). J. Vis. Exp. (2020).

Este vídeo descreve uma técnica para separar moléculas complexas de extratos de plantas usando foco isoelétrico em fase líquida. Essa técnica ajuda a purificar biomoléculas complexas em seu estado nativo, que podem ser usadas para várias aplicações a jusante.

Protocolo

1. Separação e purificação de pequenas moléculas e peptídeos do extrato de Gymnema sylvestre

Meça 0,6 g de extrato vegetal e dissolva em água destilada (60 mL) misturando em um tubo de rolo por 5 min.
NOTA: Qualquer amostra biológica solúvel e livre de sal pode ser usada para separação e purificação usando um instrumento de foco isoelétrico (IEF) em fase líquida. Amostras com concentração de sal tampão de até 10 mM podem ser usadas com resolução ligeiramente reduzida.
Centrifugue o extrato vegetal solubilizado a 10.000 x g por 5 min para remover as partículas insolúveis.
Transf....

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Resultados

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Figura 1: Configuração do aparelho IEF em fase líquida e fracionamento do extrato da planta G. sylvestre. (A) Durante a execução, (B) durante a coleta de frações, (C) após a coleta de frações e (D) peças do aparelho IEF em fase líquida, 1) membranas de troca iônica, 2) câmara de foco e núcleo da membrana, 3) conjunto de eletrodos (negativo), 4) conjunto de eletrodos (positivo).

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