Ligadura da artéria cerebral média (MCA) é uma técnica para estudo da isquemia cerebral focal em modelos animais. Neste método, o da artéria cerebral média é exposto por craniotomia e ligados por cauterização. Este método dá volumes infarto altamente reprodutível e aumentou as taxas de sobrevivência pós-operatória em comparação com outros métodos disponíveis.
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Artigo de método
A aplicação de ligadura da artéria Cerebral Média Permanente no mouse
Neste artigo
Resumo
Resumo
Isquemia cerebral focal está entre o tipo mais comum de acidente vascular cerebral vista em pacientes. Devido à importância clínica, tem havido um esforço prolongado para desenvolver modelos animais adequados para o estudo dos eventos que acontecem durante o insulto isquêmico. Estas técnicas incluem transitória ou permanente, modelos de isquemia focal ou global usando muitos diferentes modelos animais, com os roedores mais comuns são.
O método de ligadura permanente MCA que também é referido como pMCAo na literatura é usado extensivamente como um modelo de isquemia focal em roedores 1-6. Este método foi originalmente descrito para ratos por Tamura et al. em 1981 7. Neste protocolo uma craniotomia foi usado para acessar o MCA e as regiões proximal foram ocluídas por eletrocoagulação. Os infartos envolvem regiões principalmente cortical e às vezes estriado, dependendo da localização da oclusão. Esta técnica está agora bem estabelecida e usada por muitos laboratórios 8-13. Utilização precoce desta técnica levou à definição e descrição do "core infarto" e "penumbra" 14-16, e é freqüentemente usado para avaliar o potencial neuroprotetor compostos 10, 12, 13, 17. Embora os estudos iniciais foram realizados em ratos, ligadura MCA permanente tem sido usado com sucesso em camundongos com ligeiras modificações 18-20.
Este modelo produz infartos reprodutível e aumento da sobrevivência pós-taxas. Aproximadamente 80% dos acidentes vasculares cerebrais isquêmicos em humanos acontecem na área MCA 21 e, portanto, este é um modelo muito relevante para os estudos acidente vascular cerebral. Atualmente, há uma escassez de tratamentos eficazes disponíveis para pacientes com AVC, e, portanto, há uma necessidade de bons modelos para testar o potencial de compostos farmacológicos e avaliar os resultados fisiológicos. Este método também pode ser usada para estudar mecanismos de resposta a hipóxia intracelular in vivo.
Aqui, apresentamos a cirurgia de ligadura MCA em um rato C57/BL6. Descrevemos a preparação pré-cirúrgica, MCA cirurgia de ligadura e 2,3,5 trifeniltetrazólio cloreto de coloração (TTC) para quantificação dos volumes de infarto.
Protocolo
Este protocolo foi aprovado pela Universidade de Rochester comitê dedicado ao uso ético de animais na pesquisa (UCAR). Técnicas de assepsia devem ser seguidas durante o protocolo. O uso de luvas estéreis e máscara é obrigatório.
Todos os equipamentos, materiais, produtos químicos e ferramentas que são usadas durante o protocolo são descritos na Tabela 1.
1. Preparação pré-cirúrgica
- Injetar camundongos por via subcutânea com buprenorfina (0.05mg/kg) 2 h antes da cirurgia, imediatamente após a cirurgia e depois a cada 3-5 h nas 24 h primeiro período pós-operatório.
- Esterilizar todos os instr....
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Discussão
O método de ligadura permanente MCA dá volumes infarto altamente reprodutível e aumentou as taxas de sobrevivência pós-operatória em comparação com outros métodos disponíveis. A facilidade ea curta duração (~ 30 min) do processo de torná-lo ainda mais prático. O método é amplamente utilizado em ambos os ratos e ratazanas.
Esta técnica requer uma cirurgia invasiva sob um estereomicroscópio. Portanto, a experiência em operar sob um microscópio e aperfeiçoando uma craniotomia sucesso é essencia.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
A técnica cirúrgica foi originalmente adquirida no laboratório do Dr. William D. Hill, do Medical College of Georgia. Os autores também gostariam de agradecer ao Dr. David A. Rempe e Landa Prifti para o uso da câmera dissecção. Esta pesquisa foi suportada pelo NIH NS041744, NS051279, F31 NS064700 e 30815697D AHA.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| NOME | Da empresa e número CATÁLOGO | ||
| A. Soluções e Produtos Químicos | |||
| Iodo-povidona Solution, Scrub Cirúrgica | Aplicare, 82-209 | ||
| Etanol 70% | Koptec, V1001 | ||
| 2,3,5 cloreto trifeniltetrazólio (TTC) | Sigma, T8877 | ||
| Paraformaldeído 4% | Ciências Microscopia Eletrônica, 159SP | ||
| Tampão fosfato pH, Saline: 7.4 | Fez e esterilizados no laboratório. | ||
| Óleo mineral | PML Microbiologicals, R6570 | ||
| Isofluorano | A Companhia Butler, 029405 | ||
| Buprenorfina (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 | ||
| Lágrimas artificiais | A Companhia Butler, 007312 | ||
| Gel de recuperação | Clara H 2 O, 72-01-5022 | ||
| B. Materiais e Equipamentos Cirúrgicos | |||
| C57/BL6 mouse, 10-12 semanas de idade | A colônia foi criada no biotério da universidade | ||
| 100 tanque de oxigênio% | Airgas | ||
| Vaporizador anestésico e medidor de fluxo | Surgivet, Modelo 100 | ||
| Pad de aquecimento com sonda retal | Multa Ferramentas Ciência, TR200 | ||
| Microscópio de dissecação | Zeiss, Stemi 2000 | ||
| Painel de aquecimento | Petco Services Ltd. 0307-013 | ||
| Definir cauterizador pequenos vasos | Multa Ferramentas Ciência, 18000-00 | ||
| Mini bomba peristáltica | Harvard Apparatus, MPII | ||
| Seringa de 1ml | BD, 329650 | ||
| Agulha de 18G | Becton Dickinson, 305196 | ||
| Sutura Nylon cirúrgica 5,0 | Ethilon, 698H | ||
| Seccionamento de bloco | Kent Scientific, um milímetro | ||
| Razor Blades Single Edge | Ciências Microscopia Eletrônica, 71962 | ||
| Tape rótulo | Scienceware, Bel-art Produtos F13463-2075 | ||
| Esponjas de gaze | Kendall gurança 2252, Johnson e Johnson 6415 | ||
| Dica Aplicadores de algodão | Puritan 806-WCL | ||
| Ferramentas C. Cirurgia | |||
| Tesoura cirúrgica Primavera | Multa Ferramentas Ciência 15003-08 | ||
| Forceps Microdissecting angular | Multa Ferramentas Ciência 5 / 45 | ||
| Forceps Microdissecting curvas | Belas Ciência Tools 5 Ti | ||
| Tesoura reta fina | Multa Ferramentas Ciência 14568-12 | ||
| Rongeur osso curvo | Multa Ferramentas Ciência 16021-14 | ||
| Hemostat Hartman Curved | Multa Ferramentas Ciência 13003-10 |
Tabela 1. A lista de materiais, ferramentas e produtos químicos utilizados para o procedimento de ligadura MCA. A. Soluções e produtos químicos, materiais cirúrgicos e B. Equipamentos, Ferramentas Cirurgia C..
Referências
- Britton, M., Rafols, J., Alousi, S., Dunbar, J. C. The effects of middle cerebral artery occlusion on central nervous system apoptotic events in normal and diabetic rats. Int J Exp Diabesity Res. 4, 13-20 (2003).
- Ciceri, P., Rabuffetti, M., Monopoli, A., Nicosia, S.
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Reimpressões e permissões
