Ensaio de quiralidade celular de micropadronização em forma de anel: uma técnica in vitro para determinar a quiralidade multicelular com base no alinhamento celular em micropadrões em forma de anel

Resumo

Fonte: Zhang, H. et al. Um ensaio de micropadronização para medir a quiralidade celular. J. Vis. Exp. (2022)

Neste vídeo, descrevemos um ensaio de quiralidade celular para determinar o viés de alinhamento das células em um limite geométrico confinado, como um micropadrão de anel. A quiralidade é uma propriedade inerente da maioria dos tipos de células e é determinada por fatores genéticos e ambientais. Conhecer a quiralidade de uma população de células normal pode ajudar a rastrear células tratadas com drogas.

Protocolo

1. Fabricação de selos de polidimetilsiloxano (PDMS)

1. Desenhe uma matriz de anéis em microescala usando um software CAD, com um diâmetro interno de 250 μm e um diâmetro externo de 450 μm. O padrão usado neste protocolo é uma matriz de 10 x 10 com uma distância de 850 μm entre os anéis.
2. Imprima uma máscara de transparência do padrão na resolução desejada usando o serviço de impressão de máscaras de uma empresa de microfabricação (consulte a Tabela de Materiais).
   nota: As dimensões fornecidas do anel comprovadamente funcionam para muitos tipos de células.
3. Realize fotolitografia ultravioleta (UV) usa....

Resultados

Figura 1. Esquema de micropadronização celular. (A) Procedimento de microfabricação e impressão por microcontato para padronização de células. Um molde fotorresistente negativo foi feito por reticulação ultravioleta (UV) do fotorresistente por meio de uma máscara contendo características de micropadronização (1-2). Pré-polímeros elastoméricos de polidimetilsiloxano (PDMS) foram fundi.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Etanol de 200 provas	Koptec	DSP-MD-43
Sistema de microscópio BZX	Keyence	BZX-600
Meio de águia modificado de Dulbecco (DMEM), glicose alta	Gibco	11965092
Evaporador de feixe de elétrons	Temscal	BJD-1800	Revestimento de filme de ouro-titânio
Soro fetal bovino	VWR	89510-186
Fibronectina de plasma bovino	sigma	Rolamento F1141-5MG
Lâminas de microscópio de vidro	VWR	Rolamento 10024-048
Pinças de vidro	Exelta	390BSAPI
Pellets de evaporação de ouro	Materiais Avançados Internacionais	AU18
HS-(CH2)11-EG3-OH (EG3)	Prochimia	TH 001-m11.n3-0.2
LABORATÓRIO MATLAB	Obras matemáticas	MATLAB_R2020b
Células NIH/3T3	ATCC	CRL-1658
Alinhador de contato OAI	OAI	200	Fotolitografia UV
Octadecanetiol (C18)	sigma	O1858-25ML
Agitador orbital	VWR	89032-088
Solução salina tamponada com fosfato (PBS)	Produto de pesquisa internacional	Rolamento P32080-100T
Polidimetilsiloxano Sylgard 184	Dow Corning	DC4019862
Bolacha de silício	Wafer Universitário	ID#809
Piruvato de sódio	Thermo fisher científico	Rolamento 11360-070
SU-8 3050 fotorresistente	MicroChem	Y311075 0500L1GL
Pellets de evaporação de titânio	Materiais Avançados Internacionais	TI14
Máscara de transparência (com recurso)	Outputicity.com	N/A	Serviço de impressão de máscaras
Tripsina-EDTA (0,25%)	Thermo fisher científico	Rolamento 25200-072