Técnicas de Ensaio

Neste vídeo, demonstramos um ensaio para estabelecer a presença de fosfolipase no extrato bruto de veneno de Anthopleura dowii - uma anêmona marinha. O ensaio utiliza uma técnica de difusão em gel de agarose, na qual a enzima fosfolipase se difunde e decompõe os fosfolipídios incorporados no meio sólido de maneira radial.

Neste vídeo, descrevemos um ensaio de quiralidade celular para determinar o viés de alinhamento das células em um limite geométrico confinado, como um micropadrão de anel. A quiralidade é uma propriedade inerente da maioria dos tipos de células e é determinada por fatores genéticos e ambientais. Conhecer a quiralidade de uma população de células normal pode ajudar a rastrear células tratadas com drogas.

Este vídeo descreve um ensaio colorimétrico para medir o ensaio de atividade da citrato sintase mitocondrial presente no homogeneizado tecidual de Drosophila.

Neste vídeo, descrevemos um método baseado em colorimetria para determinar o teor de ferro não-heme no tecido hepático de camundongos. O sulfonato de batofenantrolina é usado como substrato cromogênico na presença de um agente redutor, que converte o ferro férrico em ferro ferroso quelatável.

Este vídeo demonstra uma técnica de quantificação para CO2 liberado durante a oxidação do substrato usando 14substratos radiomarcados com C. O 14CO2 liberado é preso em uma solução alcalina e quantificado por um contador de cintilação. A oxidação de diferentes substratos varia entre os tecidos e reflete a condição fisiopatológica do tecido.

Neste vídeo, demonstramos um procedimento para investigar a organização da septina em uma bicamada lipídica suportada por vidro in vitro usando microscopia de fluorescência de reflexão interna total.

Este vídeo descreve a técnica de estudo da montagem da proteína septina em microesferas revestidas com bicamadas lipídicas. Essa técnica ajuda a entender os conjuntos de proteínas dependentes da curvatura em superfícies curvas.

Neste vídeo, demonstramos um ensaio de triagem para identificar a eficácia de nematicidas de moléculas pequenas contra nematóides. Os nematicidas são considerados eficazes se causarem uma diminuição no número de nematóides móveis na amostra após a exposição.

Neste vídeo, descrevemos um método para a detecção de depósitos de cálcio secretados por osteoblastos usando um corante aniônico, Vermelho de Alizarina S. Os osteoblastos cultivados são primeiro corados e, em seguida, o corante é recuperado para quantificação colorimétrica dos depósitos de cálcio ou do grau de mineralização dos osteoblastos.

Neste vídeo, descrevemos o ensaio de contato larval para avaliar a toxicidade do antagonista do receptor de dopamina amitriptilina nas larvas do estágio de terceiro ínstar de mosquitos, vetores conhecidos de várias doenças infecciosas humanas. Avaliar a mortalidade larval na incubação com diferentes concentrações de amitriptilina em diferentes intervalos de tempo ajuda a determinar sua concentração letal 50.

Neste vídeo, demonstramos o ensaio de teste tópico para determinar a toxicidade de um potencial inseticida em mosquitos fêmeas adultas. Usando um antagonista do receptor de dopamina que causa inibição letal da neurotransmissão em mosquitos, este método descreve uma maneira de avaliar os efeitos tóxicos dos inseticidas na aplicação tópica.

Este vídeo demonstra um ensaio de alimentação sanguínea para avaliar a mortalidade e a fecundidade de compostos de teste com novos modos de ação em mosquitos fêmeas. Essa técnica ajuda na triagem de novas classes de inseticidas para matar a população resistente de mosquitos e controlar a propagação de doenças.

Neste vídeo, demonstramos um ensaio de agregação de proteínas baseado em células usando inibidores de proteassoma, que bloqueiam a atividade do proteassoma, impedindo que proteínas mutantes mal dobradas, fundidas a um rótulo fluorescente, sofram degradação proteassômica dependente de ubiquitina, levando ao seu acúmulo dentro do citoplasma celular. Os agregados proteicos são então visualizados e quantificados por microscopia de fluorescência.

Este vídeo demonstra um bioensaio rápido para investigar a atividade da endotoxina em uma amostra de sangue total por meio de um método baseado em quimioluminescência. Este ensaio é um teste de biomarcador rápido e sensível para o diagnóstico em estágio inicial de sepse mediada por endotoxina.

Este vídeo descreve o formato turbidimétrico do lisado de amebócitos Limulus, ou LAL, ensaio para estimar a contaminação por endotoxinas em nanoformulações de doxorrubicina lipossomal PEGilado. A turbidez da solução após a reação da endotoxina com o reagente LAL ajuda a estimar a endotoxina na amostra.

Este vídeo descreve um ensaio de coágulo de gel para determinar a presença de endotoxinas bacterianas em nanoformulações usando lisado de amebócitos Limulus derivado das células sanguíneas de caranguejos-ferradura. O ensaio ajuda a testar a contaminação por endotoxinas de produtos farmacêuticos, incluindo formulações à base de nano.

Neste vídeo, demonstramos um ensaio de alto rendimento para triagem enzimática ativa em carboidratos usando substratos de hidrogel de polímero cromogênico insolúvel. A enzima degrada esses substratos em um produto colorido solúvel que pode ser quantificado medindo a intensidade da cor do produto.

Este vídeo demonstra um ensaio para triagem de enzimas eficazes na degradação de polissacarídeos complexos em biomassa vegetal usando biomassa cromogênica insolúvel ou ICB. As enzimas hidrolisam o ICB para liberar oligossacarídeos ligados a corantes solúveis, e a atividade enzimática é avaliada por análise colorimétrica do produto da reação.

Este vídeo demonstra um método de coloração nuclear para detectar o efeito citotóxico do mitocan em células cancerígenas sensíveis a medicamentos e variantes saudáveis. A coloração dupla com corantes de ligação ao DNA, como iodeto de propídio e corante Hoechst, fornece uma distinção clara entre as células mortas e vivas, ajudando assim a avaliar a citotoxicidade do medicamento.

Neste vídeo, realizamos um ensaio de motilidade in vitro para analisar as interações actina-miosina. O movimento deslizante dos filamentos de actina nas moléculas de miosina imobilizadas é visualizado usando microscopia de fluorescência.

Neste vídeo, realizamos um ensaio de motilidade in vitro para analisar as interações actina-miosina. O movimento deslizante dos filamentos de actina nas moléculas de miosina imobilizadas é visualizado usando microscopia de fluorescência.

Este vídeo demonstra a ação capilar radial diferencial do ensaio de ligante - uma técnica para triagem sistemática de alto rendimento de proteínas de ligação ao segundo mensageiro de nucleotídeos intracelulares. Essa técnica permite a ligação direta dos mensageiros à proteína-alvo superexpressa no lisado celular - ignorando a necessidade de purificação de proteínas.

Este vídeo descreve um ensaio de degradação para proteínas mal dobradas usando tratamento com cicloheximida junto com fracionamento de detergente. Este método ajuda a estudar a dinâmica de proteínas mal dobradas e a descobrir os mecanismos aprofundados de renovação de proteínas.

Este vídeo descreve um ensaio de microplaca baseado em fluorescência in vitro para estudar a cinética de degradação de uma proteína mutante de luciferase mal dobrada marcada com fluorescência expressa nos núcleos de células de mamíferos transfectadas. O ensaio envolve o tratamento de células que expressam a proteína mutante fluorescente com um inibidor de tradução e um inibidor de proteassoma para avaliar a degradação mediada por proteassoma da proteína mal dobrada.

O vídeo demonstra o ensaio de luciferase usado para quantificar proteínas marcadas com luciferase. O ensaio usa uma enzima luciferase projetada composta por um grande fragmento que se liga ao pequeno fragmento, que é conjugado com uma proteína de interesse. As subunidades ligadas formam uma enzima ativa que, na presença do substrato, libera um sinal luminescente. Este sinal é então quantificado usando um luminômetro.

Este vídeo demonstra um ensaio baseado em imagem in vivo para determinar o declínio da proteostase devido ao envelhecimento. O ensaio usa Caenorhabditis elegans expressando a proteína de fusão de poliglutamina YFP nos músculos da parede corporal para medir a agregação de poliglutamina associada à idade e a indução de proteotoxicidade, levando à paralisia.

Neste vídeo, demonstramos o ensaio homogêneo de proximidade luminescente amplificado - um ensaio de proximidade baseado em esferas. Ele utiliza grânulos aceptores e doadores de tamanho homogêneo, imobilizados com duas proteínas que tendem a interagir para rastrear pequenas moléculas potenciais que inibem as interações proteicas.

Este vídeo demonstra um ensaio para monitorar a acidificação intestinal em moscas Drosophila. Após a ingestão de alimentos suplementados com um corante indicador de pH, a acidificação do lúmen intestinal resulta em uma mudança na cor do corante. A inspeção visual do trato digestivo das moscas para examinar a mudança de cor fornece evidências de acidificação.

Este vídeo descreve um ensaio baseado em leitor de placas para medir a captação de cálcio mitocondrial em mitocôndrias isoladas. O ensaio analisa o sinal de fluorescência de um corante fluorescente sensível ao cálcio para estudar a cinética da captação de cálcio mitocondrial e da sobrecarga de cálcio.

Este vídeo descreve um método colorimétrico para quantificar o teor de proteína solúvel nos tecidos vegetais. O método usa o corante Coomassie Brilliant Blue G-250, que interage com a proteína solúvel para formar um complexo de corante proteico-corante estável de cor azul, proporcional ao teor de proteína solúvel no tecido.

Este vídeo descreve o método para quantificar os carboidratos digeríveis presentes nos tecidos vegetais. Isso ajuda a coletar dados de vários tecidos vegetais para estudar a ecologia nutricional, as interações planta-herbívoro e a dinâmica da teia alimentar.

Neste vídeo, demonstramos o ensaio de luciferase para quantificar o crescimento do patógeno intracelular Toxoplasma gondii. Utilizando uma cepa de Toxoplasma que expressa a enzima luciferase após infectar as células hospedeiras, a atividade da luciferase é detectada na cultura de células infectadas para determinar a reprodução bem-sucedida do parasita.

O vídeo demonstra o ensaio de luciferase usado para determinar a eficácia de um inibidor químico antiparasitário contra o patógeno intracelular Toxoplasma gondii. O estudo envolve parasitas que expressam luciferase invadindo as células hospedeiras para se replicar e sobreviver. O inibidor químico se liga às cisteína proteases do parasita e inibe a replicação. A atividade da luciferase detectada é proporcional às mudanças nas dobras no crescimento do parasita, determinando a eficácia do fármaco...

Este vídeo demonstra um protocolo in vitro para estudar a remoção mediada por Msp1 de proteínas TA mal localizadas integradas à bicamada lipídica de lipossomas. As proteínas Msp1 e TA são co-reconstituídas em lipossomas, e a translocação dependente de ATP das proteínas TA é confirmada por meio da purificação de afinidade.

Neste vídeo, descrevemos um método simples e robusto para determinar o potencial citotóxico de um fármaco tripanocida contra um parasita, o Trypanosoma cruzi, expressando a enzima β-galactosidase. β-galactosidase serve como um indicador de lise celular, e sua atividade pode ser usada para avaliar os efeitos do fármaco.

Neste vídeo, demonstramos um ensaio que investiga os mecanismos de liberação de monoamina dos neurônios de fatias de cérebro de rato ex vivo metabolicamente ativas, quando tratadas com drogas de teste. O ensaio demonstra que as drogas neuroestimulantes induzem a liberação de monoamina através dos transportadores celulares de monoamina, enquanto a alta concentração de KCl induz a liberação de monoamina vesicular mediada por exocitose de vesícula sináptica.

Este vídeo descreve um método in vivo para rastrear o potencial protetor de compostos de teste neuroprotetores na redução da agregação poliQ em células musculares da parede corporal de nematóides e na melhoria da proteotoxicidade associada à agregação.

Neste vídeo, descrevemos um método para avaliar o efeito neuroprotetor de um composto de teste, o astragalano, na sobrevivência neuronal em Caenorhabditis elegans da neurotoxicidade mediada por poliQ. O ensaio usa Caenorhabditis elegans expressando as repetições poliQ anormalmente expandidas fundidas à GFP em seus neurônios ASH para medir a sobrevivência neuronal após o tratamento com o composto de teste.

Este vídeo descreve um ensaio de evitação osmótica para examinar o comportamento de quimioevitação em um modelo de verme transgênico. O comportamento de evitação é testado em uma placa na presença de uma barreira osmótica alta e quimioatraente. Os vermes com perda funcional de neurônios são atraídos pelo quimioatraente, atravessam a barreira osmótica alta e ficam paralisados na zona de armadilha por causa da solução anestésica.

Este vídeo descreve um ensaio colorimétrico para medição de lactato em lisados celulares usando a enzima lactato desidrogenase. Esta enzima converte lactato em piruvato, juntamente com a conversão de NAD em NADH que reage com corantes de tetrazólio e dá um produto colorido que pode ser medido espectrofotometricamente para quantificar o lactato.

Este vídeo descreve um ensaio colorimétrico para medir quantitativamente o piruvato nas frações celulares de Caenorhabditis elegans. Utilizando o peróxido de hidrogênio produzido a partir da reação enzimática da piruvato oxidase com o piruvato celular, um corante cromogênico é oxidado para produzir um produto colorido, medido usando colorimetria para determinar a concentração de piruvato.

Este vídeo descreve um ensaio espectrofotométrico para a estimativa da atividade da glicogênio sintase. O método baseia-se na redução da absorbância do NADH com o tempo e indica a atividade da glicogênio sintase.

Neste vídeo, descrevemos um ensaio espectrofotométrico qualitativo para determinar a extensão da ramificação em uma amostra de glicogênio com uma estrutura não caracterizada. A comparação dos máximos de absorbância da amostra não caracterizada com os de polissacarídeos com estruturas ramificadas conhecidas indica a presença de ramificação na amostra não caracterizada.

Este vídeo demonstra o ensaio de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliar o estresse oxidativo em amostras biológicas.

Este vídeo demonstra o ensaio de complementação de luciferase dividida para detectar interações proteína-proteína. Neste ensaio, as proteínas de interesse são marcadas em pequenos e grandes fragmentos da enzima luciferase. Quando as proteínas interagem, os fragmentos grandes e pequenos se combinam para formar um complexo enzimático ativo, que na presença de um substrato específico, libera luminescência brilhante que pode ser medida.

Este vídeo demonstra a técnica de coleta de uma amostra de solo para análise de propriedades hidráulicas. A área de amostragem é limpa e a crosta superior é evacuada. O anel de amostragem é então colocado no solo para coletar a amostra. O anel com a amostra é então limpo, rotulado, embalado e transferido sem ser perturbado para análise.

Fonte:Léa Rubira1, Hélène Sturer1, Louise Combette1, Sandra Santini1, Stéphane Renaud1, Cyril Fersing1,21Departamento de Medicina Nuclear, Institut régional du Cancer de Montpellier (ICM), Univ Montpellier, 2IBMM, Univ Montpellier, CNRS, ENSCMEste vídeo demonstra a infusão segura e controlada de um radiofármaco usando uma bomba peristáltica com um sistema de de linha dupla. A configuração inclui a conexão de linhas salinas e de infusão, o posicionamento do frasco blindado e o início da...

Source:Anthony J. Yosick1,2, Christine Massie1, Emma Knapp2, Hani A. Awad1,2,31Department of Biomedical Engineering, University of Rochester, US2Center for Musculoskeletal Research, Department of Orthopedics, University of Rochester Medical Center, USA3Department of Orthopedics, University of Rochester Medical Center, USAThe video demonstrates fall-related wrist fractures using human cadaver forearms with varying bone densities. Specimens are standardized by removing upper soft tissue,...

Neste vídeo, demonstramos um ensaio para visualizar e quantificar a captação celular de vesículas extracelulares ou EVs. Este ensaio utiliza imagens fluorescentes 3D usando um microscópio confocal e permite distinguir EVs internalizados daqueles aderidos à superfície celular.

Este vídeo descreve um ensaio de invasão usando uma matriz de três câmaras baseada em impedância elétrica. Esta técnica mede o potencial invasivo das células cancerígenas sob a influência de fatores solúveis secretados pelas células estromais residentes em microambientes tumorais.

Neste vídeo, demonstramos um ensaio de proteção enzimática in vitro baseado em lisostafa para quantificar a internalização de Staphylococcus aureus em células A549. O ensaio auxilia em estudos qualitativos, quantitativos e de caracterização da carga bacteriana intracelular nas células hospedeiras.

Neste vídeo, descrevemos um ensaio de reabsorção osteoclástica in vitro em placas de cultura de células revestidas com fosfato de cálcio cultivadas com osteoclastos derivados de células mononucleares de sangue periférico humano. Os osteoclastos formam um anel de actina característico na matriz revestida de fosfato de cálcio da placa de cultura de células e degradam a matriz dentro da região do anel de actina para liberar íons de cálcio e fosfato, resultando na formação de poços de reabsorção...

Neste vídeo, descrevemos um ensaio de separação de fases, em que proteínas intracelulares compreendendo regiões intrinsecamente desordenadas fundidas a um domínio de oligomerização fotossensível são induzidas por meio de exposição à luz azul para se autoassociarem em condensados semelhantes a líquidos sem membrana.

Este vídeo demonstra um ensaio baseado em microesferas transportadoras modificadas incorporando pericitos para estudar o brotamento endotelial durante os estágios iniciais da angiogênese. O ensaio fornece um modelo experimental in vitro para entender os mecanismos moleculares da angiogênese e o efeito da terapêutica antiangiogenética.

Este vídeo descreve um ensaio in vitro para determinar a hemólise ou lise de glóbulos vermelhos induzida por ionóforo de cálcio em uma amostra humana. O ensaio mede a porcentagem de hemólise quantificando a hemoglobina liberada pelos eritrócitos rompidos.

Neste vídeo, demonstramos o ensaio de ligação da Anexina V para medir o grau de eriptose, morte celular programada por eritrócitos, usando coloração fluorescente com Anexina V. Os eritrócitos apoptóticos demonstram translocação de fosfatidilserina do folheto interno para o externo da membrana celular, fazendo com que a Anexina V marcada com fluoróforo se ligue à fosfatidilserina translocada, emitindo assim um sinal fluorescente.

Este vídeo demonstra uma técnica in vitro para avaliar a biodisponibilidade de ferro em fontes alimentares complexas. A técnica combina a simulação da digestão humana com a absorção de ferro por células Caco-2 diferenciadas. A formação de ferritina intracelular atua como um marcador para a absorção celular de ferro.

Este vídeo demonstra um ensaio in vitro para medir indiretamente a captação intracelular de glicose. O ensaio usa um análogo de glicose marcado com fluorescência para estabelecer uma correlação entre a depleção de glicose extracelular e a captação intracelular de glicose.

Neste vídeo, demonstramos uma técnica ex vivo para medir a depleção análoga de glicose extracelular em órgãos de camundongos colhidos. Envolve a incubação do tecido do camundongo em uma solução contendo desoxiglicose marcada com fluorescência, que é absorvida pelas células. A captação de análogos de glicose pode ser determinada indiretamente medindo a fluorescência do meio incubado.

Este vídeo descreve a medição da contração da célula do músculo liso aórtico (SMC) usando detecção de impedância de substrato de célula elétrica, ou ECIS. O ECIS mede a locomoção das células e é um método confiável para medir as contrações.

Neste vídeo, descrevemos um método in vitro para avaliar o potencial alérgico de um antígeno para induzir a degranulação de basófilos. A β-hexosaminidase é usada como um índice de liberação de mediadores químicos, e a atividade enzimática da β-hexosaminidase é medida usando um substrato fluorogênico.

Neste vídeo, demonstramos um ensaio rápido de adição única para avaliar a viabilidade celular em organoides derivados de pacientes após o tratamento com um agente de teste usando níveis de ATP intracelular como marcador de atividade metabólica celular. Os níveis intracelulares de ATP são medidos usando a reação luciferase/luciferina, onde a intensidade da luz emitida indica a viabilidade celular e, por sua vez, a potência inibidora do crescimento do agente de teste.

Este vídeo descreve a técnica de visualização do estresse oxidativo em organoides cultivados. Este trabalho ajuda a entender o nível de estresse oxidativo devido ao acúmulo de ROS nos vários tipos celulares presentes em um organoide após o tratamento com diferentes moduladores de ROS.

Este vídeo demonstra um ensaio de citometria de fluxo para quantificar os níveis de ROS em organoides intestinais 3D obtidos de camundongos transgênicos que expressam GFP. Este método fornece um modelo experimental in vitro para investigar a eficácia dos compostos de teste na produção de ROS.

Neste vídeo, demonstramos um método para avaliar o efeito dos osmólitos na formação de persistentes bacterianos. As células bacterianas são primeiro expostas a osmólitos para induzir estresse osmótico, desencadeando a formação de persistentes, depois tratadas com antibióticos para enumerar os persistentes.

Este vídeo demonstra um método baseado em microscopia de fluorescência para estudar a competição bacteriana no nível de uma única célula. Este método fornece informações sobre a estrutura e função das comunidades bacterianas.

Este vídeo descreve o ensaio de placa viral do vírus herpes simplex infeccioso ou HSV. As partículas virais diluídas são inoculadas na monocamada das células epiteliais. Após a incubação, o vírus forma placas e é contado visualmente para determinar o título do vírus infeccioso.

Neste vídeo, o ensaio TUNEL é realizado para detectar a presença de células apoptóticas em uma amostra. O estudo envolve o uso de uma DNA polimerase especial - desoxinucleotidil transferase terminal - que catalisa a adição de dUTPs marcados ao terminal 3 'de DNA fragmentado, que pode ser observado e identificado sob um microscópio de fluorescência.

Este vídeo descreve um ensaio luminescente de Caspase-3/7 in vitro para quantificar a morte celular ou apoptose. O ensaio mede a luminescência produzida após a clivagem da caspase-3/7 de um substrato DEVD pró-luminescente. A luminescência gerada é proporcional à atividade da caspase-3/7.

Este vídeo demonstra uma técnica de imunocoloração para visualizar o engolfamento de células apoptóticas nas células embrionárias homogeneizadas de Drosophila melanogaster. Este método fornece informações sobre a fisiologia celular, determinando a extensão do engolfamento celular apoptótico.

Neste vídeo, demonstramos o ensaio de eferocitose para estudar a depuração de células apoptóticas usando microscopia confocal. A eferocitose é um processo de várias etapas em que as células apoptóticas são engolidas por fagócitos e degradadas dentro de vesículas chamadas eferrossomos. Este protocolo fornece um método para visualizar porções internalizadas e não internalizadas de células apoptóticas individuais e quantificar a eferocitose.

Neste vídeo, demonstramos que, na presença de um inibidor de fosfodiéster, o ciclo celular do oócito é interrompido na prófase-I, durante o qual os mRNAs transcritos são armazenados na ausência de tradução. Após a liberação do inibidor, a maturação do oócito é retomada e as células entram na metáfase. O sinal do mRNA repórter fundido com o gene alvo na metáfase-I indica a ativação da maquinaria translacional e da expressão proteica.

Este vídeo descreve um ensaio fluorométrico in vitro para avaliar os efeitos de formulações de lágrimas artificiais na atividade metabólica celular de células epiteliais da córnea usando solução de azul de Alamar à base de resazurina. Uma formulação não tóxica mantém as células em um estado saudável e metabolicamente ativo, facilitando a redução da resazurina em uma resorufina altamente fluorescente.

Este vídeo descreve um ensaio baseado em imagens de microscopia confocal para medir a captação de cálcio mitocondrial em células cultivadas. O ensaio usa o corante fluorescente sensível ao cálcio Rhod-2/AM para medir o cálcio mitocondrial em células cultivadas permeabilizadas.

Este vídeo discute o ensaio de vazamento de fluorescência para estudar as interações de peptídeos que penetram nas células com as membranas celulares usando imitadores de membrana celular - grandes vesículas unilamelares, ou LUVs, encapsuladas com um corante fluorescente e um atenuador.

Este vídeo demonstra uma técnica de ensaio para avaliar a calcificação das células intersticiais da válvula aórtica in vitro. O ensaio ajuda a quantificar a concentração de cálcio usando o reagente arsenazo III, um corante sensível ao cálcio que reage com íons de cálcio para formar um complexo cálcio-arsenazo de cor roxa.

Este vídeo descreve a técnica para registrar a atividade epileptiforme de fatias organotípicas do córtex rinal-hipocampo ex vivo usando eletrofisiologia ou configuração de EEG. Isso ajuda a estudar a dinâmica e a progressão da epileptogênese e a rastrear potenciais alvos terapêuticos para tratar a epilepsia.

Este vídeo descreve um ensaio de cicatrização de feridas em co-cultura sem contato para avaliar a capacidade migratória de mioblastos murinos. Isso ajuda a entender os componentes de envio e recepção de sinal das interações parácrinas de sinalização Wnt não canônicas in vitro.

O vídeo demonstra o ensaio cometa para detectar danos ao DNA após a exposição a agentes nocivos. Sob condições alcalinas, o DNA se desenrola e desnatura e, após a eletroforese, o DNA não danificado e danificado migra de maneira diferente no gel de agarose, formando uma estrutura em forma de cometa. O DNA não danificado de migração lenta forma a cabeça circular do cometa, enquanto os fragmentos de DNA danificados de migração rápida formam a cauda alongada do cometa.

Este vídeo demonstra uma técnica in vitro para estimar a absorção de aminoácidos por células estromais derivadas da medula óssea. Os transportadores de aminoácidos dependentes de Na+ medeiam a captação de aminoácidos radiomarcados dentro das células, e a captação celular é estimada medindo a radioatividade.

Neste vídeo, demonstramos o processo de monitoramento em tempo real de eventos celulares, incluindo a proliferação de células aderentes, por meio de um ensaio de impedância celular. Aqui, as células aderentes atuam como isolantes, restringindo o fluxo de corrente entre os eletrodos e aumentando a impedância.

Neste vídeo, discutimos a correlação entre o CIT50 e a multiplicidade de infecções virais. As células infectadas pelo vírus apresentam efeitos citopáticos, causando sua morte e desprendimento do microeletrodo de ouro, o que, por sua vez, reduz a impedância.

Este vídeo descreve uma técnica baseada em impedância celular para estudar a cinética de sobrevivência de vírus que induzem efeitos citopáticos. O método mede a impedância elétrica de células aderentes infectadas por vírus pré-tratadas com solução salina.

Este vídeo demonstra o desenvolvimento de um modelo ex vivo de brotamento coroidal para estudar a angiogênese microvascular ocular. O ensaio envolve a cultura de explantes oculares de camundongos contendo o tecido coróide ligado à esclera e ao epitélio pigmentar da retina sob condições específicas que promovem o brotamento microvascular da coroide.

Este vídeo descreve um ensaio repórter baseado em células para determinar a atividade estrogênica de compostos derivados de plantas. Um composto com atividade semelhante ao estrogênio imita sua ligação aos receptores de estrogênio e impulsiona a transcrição do gene da enzima repórter a jusante. A enzima repórter gera bioluminescência em uma reação, indicando a atividade estrogênica do composto.

Este vídeo descreve a transferência de energia de ressonância de Förster resolvida no tempo ou ensaio TR-FRET para determinar a fosforilação de proteínas endógenas com a ajuda de fluoróforos doadores e aceptores marcados em anticorpos específicos para uma proteína de teste. Esta técnica é projetada para medir a fosforilação de proteínas de teste em lisados celulares.

Neste vídeo, descrevemos um método baseado em luminescência para avaliar a neurotoxicidade de compostos de pequenas moléculas promotores de crescimento de neuritos na viabilidade de neurônios derivados de hNPC. O ensaio mede o nível de ATP intracelular, um indicador da viabilidade celular, para avaliar a neurotoxicidade após o tratamento com o composto de teste.

Este vídeo demonstra a técnica de multiespectrometria ecográfica por radiofrequência (REMS) para avaliar a densidade mineral óssea (DMO). O paciente é posicionado em decúbito dorsal e o gel de ultrassom é aplicado no colo do fêmur, um local propenso a fraturas no fêmur. A sonda então emite ondas de ultrassom, que refletem no tecido ósseo a uma velocidade influenciada pela DMO. A sonda captura essas ondas refletidas, permitindo a quantificação da DMO.

Este vídeo demonstra a aspiração percutânea de espermatozóides do epidídimo de um paciente com azoospermia, uma condição caracterizada pela ausência de espermatozóides no sêmen. O procedimento envolve a desinfecção da área escrotal, aspiração do líquido epididimal usando uma seringa com uma solução de cultura especializada e processamento da amostra coletada para isolar espermatozóides viáveis. Os espermatozóides preparados estão prontos para uso em procedimentos avançados de tratamento de...

Fonte:Elettra Leo1, Luiza H.D. Cardoso1, Sabine Schmitt1, Erich Gnaiger11Instrumentos OroborosEste vídeo explica como o fluxo de oxigênio é usado para avaliar a respiração mitocondrial em células vivas e permeabilizadas de mamíferos. Demonstra o uso sequencial de digitonina, substratos metabólicos, ADP, um desacoplador e um inibidor para caracterizar diferentes estados respiratórios. O perfil de fluxo de oxigênio resultante revela a função mitocondrial e a eficiência do acoplamento de energia...

Este vídeo descreve uma técnica de imunoensaio usando esferas magnéticas fluorescentes ou microesferas acopladas a diferentes antígenos para detectar simultaneamente vários isotipos de anticorpos em uma amostra de soro. O ensaio é útil para entender a soroconversão durante uma infecção ou pós-vacinação.

Neste vídeo, demonstramos um ensaio de imunoprecipitação, chamado ensaio de captura de VLP, para isolar partículas semelhantes a vírus que exibem antígenos, ou VLPs, de uma amostra. O antígeno se liga a anticorpos específicos ligados a esferas magnéticas, formando um complexo antígeno-anticorpo imobilizado que é posteriormente separado e armazenado para análise posterior.

Este vídeo demonstra uma técnica de quantificação sensível de fosforilação de proteínas usando um ensaio pull-down de molécula única. A funcionalização do polietilenoglicol-biotina e o uso de anticorpos marcados aumentam a detecção de tirosina fosforilada com especificidade.

Este vídeo demonstra o método in vitro para SUMOilação de proteínas de substrato usando uma cascata enzimática sequencial. Além disso, o status SUMOilado da proteína é identificado usando a técnica de eletroforese e immunoblotting.

Neste vídeo, mostramos o ensaio baseado no sistema HiBit-RBD bioreporter para detectar anticorpos neutralizantes do SARS-CoV-2. Este sistema tem como alvo o domínio RBD viral usando um sistema repórter bioluminescente contendo HiBiT fundido ao domínio RBD.

Neste vídeo, demonstramos um ensaio colorimétrico in vitro para detectar a presença de anticorpos neutralizantes contra vetores do sorotipo 6 do vírus adeno-associado recombinante que expressam fosfatase alcalina (rAAV6) em amostras de soro de ovelhas. O ensaio utiliza a reação entre o AAV que codifica um gene da fosfatase alcalina placentária humana e seu substrato para gerar um produto roxo insolúvel.

Este vídeo demonstra um ensaio baseado em imunofluorescência altamente sensível para detectar danos oxidativos induzidos por PM2.5 no coração de embriões de peixe-zebra, medindo os níveis de 8-OHdG e γH2AX, que indicam danos ao DNA e quebras de DNA de fita dupla, respectivamente.

Este vídeo demonstra a técnica de avaliação da morte neuronal em fatias organotípicas do córtex rinal-hipocampo. A morte neuronal ocorre por meio de crises epilépticas em evolução - semelhantes à epilepsia in vivo - e é detectada por meio de coloração dupla das células mortas usando iodeto de propídio e imunofluorescência.

Este vídeo demonstra a detecção de complexos anticorpo-antígeno quimicamente conjugados por meio da técnica de ensaio imunoenzimático em sanduíche, ou ELISA. O anticorpo capturado se liga ao epítopo específico do antígeno do conjugado anticorpo-antígeno, que pode ser visualizado posteriormente usando um anticorpo secundário ligado a enzimas.

Neste vídeo, demonstramos um ensaio de imunofluorescência baseado em EGFP para identificar a eficácia das proteínas-alvo no crescimento de neuritos de neurônios corticais primários. Os neurônios primários são transfectados com uma proteína fluorescente, EGFP, e uma proteína-alvo e, em seguida, um imunoensaio é realizado para investigar o efeito da proteína-alvo no crescimento de neuritos.

Neste vídeo, demonstramos o imunoensaio de eletroquimioluminescência para a quantificação dos níveis de proteína-alvo em diferentes amostras. Este ensaio é baseado na luminescência produzida na reação eletroquímica. A intensidade da luz emitida é proporcional à quantidade da proteína alvo na amostra.

O vídeo descreve a preparação de uma amostra de tecido para imagem de citometria de massa. O tecido é primeiro processado para desmascarar os epítopos do antígeno, permeabilizar as células e bloquear locais de ligação de anticorpos não específicos. Em seguida, o tecido é incubado com um coquetel de anticorpos conjugado com metal e uma coloração nuclear. Finalmente, a amostra de tecido tratada é fotografada usando um scanner óptico.

Este vídeo demonstra a preparação de plasma rico em plaquetas (PRP) de alta qualidade por meio da triagem da contagem de plaquetas, coleta e centrifugação de sangue e isolamento de plaquetas. Este PRP é usado em aplicações terapêuticas para regeneração e cicatrização de tecidos.