Ensaio de β-galactosidase para avaliar a citotoxicidade induzida por drogas em parasitas

Neste artigo

Resumo

Fonte: Alonso, V. L. et al. In Vitro Triagem de medicamentos contra todos os estágios do ciclo de vida do Trypanosoma cruzi usando parasitas que expressam β-galactosidase. J. Vis. Exp. (2021)

Neste vídeo, descrevemos um método simples e robusto para determinar o potencial citotóxico de um fármaco tripanocida contra um parasita, o Trypanosoma cruzi, expressando a enzima β-galactosidase. β-galactosidase serve como um indicador de lise celular, e sua atividade pode ser usada para avaliar os efeitos do fármaco.

Protocolo

1. Ensaio de β-galactosidase

NOTA: A quantificação da atividade da β-galactosidase é usada como uma forma indireta de determinar o número de parasitas. Espera-se que o crescimento seja inibido na presença de um composto tripanocida, levando a um menor número de parasitas em comparação com o controle não tratado, o que se refletirá em uma menor atividade de β-galactosidase e, portanto, menor absorbância.

Incube os parasitas com BZN
1. Adicione 100 μL de solução 2x benznidazol (BZN) correspondente por poço para atingir uma concentração final de BZN de 80, 40, 20, 10, 5 e ....

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Resultados

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Figura 1: Cálculo do valor IC50 do benznidazol para a forma epimastigota Dm28c. (A) Uma placa de 96 poços com epimastigotas tratados com diferentes concentrações de BZN (2,5, 5, 10, 20, 40 e 80 μM) antes da adição de CPRG (1), após a adição inicial de CPRG e detergente (2) e após a incubação com CPRG e detergente mostrando a mudança de cor (3). (B) Gráfico XY das con.......