Técnica de registro baseada em eletroencefalografia para registrar a atividade epileptiforme

Resumo

Fonte: Carvalho, M. et al., Um modelo de epileptogênese em culturas de fatias organotípicas do córtex renal-hipocampo. J. Vis. Exp. (2021).

Este vídeo descreve a técnica para registrar a atividade epileptiforme de fatias organotípicas do córtex rinal-hipocampo ex vivo usando eletrofisiologia ou configuração de EEG. Isso ajuda a estudar a dinâmica e a progressão da epileptogênese e a rastrear potenciais alvos terapêuticos para tratar a epilepsia.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação de fatias de córtex rinal-hipocampo

NOTA: A preparação de fatias de córtex rinal-hipocampo usa ratos P6-7 Sprague-Dawley.

1. Configuração da cultura e preparação do meio
   1. Na véspera da cultura, preparar os meios necessários e colocá-los a 4 °C.
   2. Prepare o meio de dissecação: 25 mM de glicose em solução salina balanceada Gey's (GBSS).
   3. Prepare o meio de cultura: 50% Opti-MEM, 25% ....

Resultados

Figura 1: Procedimento detalhado para a preparação de fatias organotípicas do córtex rinal-hipocampo. (A) Remova o cérebro da cabeça e coloque-o em GBSS gelado com a superfície dorsal voltada para cima. (B) Insira a pinça no cerebelo. Abra o cérebro através da linha média e remova o excesso de tecido sobre o hipocampo. (C) Com uma espátula cortada ab.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Líquido cefalorraquidiano artificial (aCSF)			caseiro
Suplemento B-27™ (50X), sem soro	Thermo Fisher Científico	Rolamento 17504-044
Lâminas para cabo de bisturi	Ferramentas de Belas Ciências	Rolamento 10011-00
Albumina de soro bovino (BSA)	NZYTech	MB04602	5% de BSA é usado para diluir os anticorpos primários. Adicione 0,5 g de BSA em 10 mL de PBS.
Sistema de câmara de fatia de cérebro/tecido	Warner Instruments
Insertos de cultura de células, 30 mm, PTFE hidrofílico	Millipore SAS	PICM03050
Incubadora convencional	Thermo Scientific Heraeus	BB15, linha de função	Defina para 37 °C e 5% de CO2
Solução salina balanceada de Gey (GBSS)	Indústrias Biológicas	01-919-1A
Eletrodos de vidro	Produtos Científicos	GB150F-10	Dicas redondas caseiras
Câmara de interface	Warner Instruments	Topo BSC-HT Haas
Espátula de íris curva	Ferramentas de Belas Ciências	Rolamento 10092-12
Papel de limpeza de lentes	ENDURECER
Solução de L-Glutamina 200 mM (Q)	Thermo Fisher Científico	Rolamento 25030-024
Picador de tecidos	O Laboratório Mickle Engineering CO. LTD.	MTC/2	Defina para 350 μm