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Artigo de método
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8 de julho de 2025
Fonte: Borges, C. R. et al., Avaliação do Estresse Oxidativo em Amostras Biológicas Utilizando o Ensaio de Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico. J. Vis. (2020)
Este vídeo demonstra o ensaio de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliar o estresse oxidativo em amostras biológicas.
Todos os procedimentos envolvendo participantes humanos foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano e foram revisados pelo conselho de revisão institucional local
1. Ensaio TBARS
NOTA: Uma vez iniciado o ensaio TBARS, ele deve ser concluído sem parar.
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 1x PBS estéril pH 7,4 1 L | VWR, PA | 101642--262 | Reagente de lise celular |
| Tubo de centrífuga autônomo de 50 mL | Corning, Nova Iorque | CLS430897 | Material geral |
| Placa de 96 poços, não tratada, transparente, com tampa, não estéril | Thermo Fisher Scientific, MA | 280895 | Para medir a absorbância |
| Dispositivo de filtro de rotação centrífuga Amicon Ultra-0.5 100 kD | Fisher Scientific, NH | UFC510024 | Purificação de LDL |
| Tampas para tubos de vidro | Thermo Fisher Scientific, MA | 14-930-15D | Para ensaio TBARS |
| Cloreto de cobre II | SIGMA, MO | 222011-250G | Para induzir a oxidação |
| Tubos de cultura, descartáveis, com acabamento com tampa de rosca, vidro borossilicato (13 x 100 mm) | VWR, PA | Rolamento 53283-800 | Para ensaio TBARS |
| Meio Essencial Mínimo de Eagle (EMEM) | ATCC, VA | HB-8065 | Meios de célula HepG2 |
| Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1,5 mL | eppendorf, NY | 22363204 | Material geral |
| Eppendorf Tubos Safe-Lock, 2,0 mL | Genesee Sceitific, Califórnia | 22363352 | Material geral |
| Soro fetal bovino fonte dos EUA | Omega Scientific, CA | FB-11 | Para cultura de células |
| Ácido Acético Glacial | SIGMA, MO | 27225-1L-R | Reagente TBARS |
| Coquetel Inibidor de Protease Halt (100x) | Thermo Scientific, MA | Rolamento 87786 | Reagente de lise celular |
| HEPES | SIGMA, MO | H3375-250G | Solvente LDL |
| Ácido clorídrico (HCl) | Fisher Scientific, NH | A144-212 | Reagente de lise celular |
| Centrífuga Legend Micro 17 | Thermo Scientific, MA | 75002431 | Material geral |
| Lipoproteína de Baixa Densidade Plasmática Humana | Atenas Pesquisa e Tecnologia, GA | 16/12/120412 | Protótipo de matriz biológica |
| Barras de agitação magnéticas, Octógono 6-Sortimento | VWR, PA | Rolamento 58948-025 | Material geral |
| Malondialdeído bis (dimetilacetal) | SIGMA, MO | 8207560250 | Padrão TBARS |
| Espectrofotômetro de microplacas Multiskan Go | Fisher Scientific, NH | 51119200 | Para medir a absorbância |
| NP-40 | EMD Millipore Corp, MA | Rolamento 492016-100ML | Reagente de lise celular |
| cloreto de sódio | SIGMA, MO | S7653-1KG | Reagente de lise celular |
| Dodecil sulfato de sódio (SDS) | SIGMA, MO | Rolamento 436143-100G | Reagente TBARS |
| hidróxido de sódio | SIGMA, MO | 367176-2.5KG | Reagente TBARS |
| Concentrador SpeedVac | Thermo Scientific, MA | SC250EXP | Para concentrar lisados celulares |
| Ácido tiobarbitúrico | SIGMA, MO | T5500-100G | Reagente TBARS |
| Base TRIS | Fluka, Geórgia | Rolamento 93362 | Reagente de lise celular |
