Tecnologia de interferometria de biocamada para detectar interações entre ligante e analito

Abstract

Fonte: Desai, M., et al. Aplicação de interferometria de biocamada (BLI) para estudar interações proteína-proteína na transcrição. J. Vis. Exp. (2019)

Neste vídeo, demonstramos a tecnologia de interferometria de biocamada (BLI) para detectar as interações intermoleculares entre ligantes e analitos alvo em tempo real. O BLI mede as mudanças no padrão de interferência da luz branca refletida por uma camada de ligantes imobilizados na superfície de um biossensor à medida que interagem com os analitos em solução.

Protocol

1. Hidratação do biossensor e configuração do ensaio

1. Ligue a máquina BLItz.
2. Certifique-se de que a máquina esteja conectada ao computador por meio de uma porta de saída de dados USB na parte traseira da máquina.
3. No computador, abra o software associado (por exemplo, BLItz Pro) e clique em Cinética Avançada no lado esquerdo da tela.
4. No software, digite todas as informações apropriadas sobre o experimento (incluindo o Nome do Experimento, Descrição, ID da Amostra e Concentração de Proteína) em cada título respectivo.
5. Clique em Tipo de biossensor e escolha Ni-NTA no men....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Máquina BLItz	ForteBio	45-5000	dispositivo
Bandeja de biossensor Ni-NTA Dip and Read	ForteBio	18-5101	Biossensores Ni-NTA prontos para uso para proteínas marcadas com poli-His
Suporte de queda	ForteBio	Telefone: 45-5004	dispositivo
Tubos de PCR (0,2 mL)	Thomas Científico	CLS6571	Artigos de plástico
Tubos de microcentrífuga (pretos)	Thermo Fisher Científico	03-391-166	Artigos de plástico
Kimwipes	Thermo Fisher Científico	06-666A	Artigos de plástico
TDT	Thermo Fisher Científico	R0861	químico
Edta	MilliporeSigma	E6758	químico
MgCl2	MilliporeSigma	M8266	químico
NaCl	MilliporeSigma	S9888	químico
Tris-HCl	Ouro Bio	T095100	buffer