Isolamento de células T baseado em flotação usando classificação de células ativada por flutuabilidade

Abstract

Fonte: Snow, T., et al. Isolamento, ativação e expansão de células T baseadas em flutuação de amostras de células mononucleares do sangue periférico humano usando microbolhas. J. Vis. (2022)

Este vídeo demonstra o isolamento de células T de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) usando a tecnologia de classificação de células ativadas por flutuabilidade funcionalizada (BACS). A técnica de isolamento envolve a seleção positiva de células T CD3 +, marcando as células com anticorpos anti-CD3 biotinilados e separando as células ligadas a anticorpos usando microbolhas ligadas à estreptavidina.

Protocol

1. Isolamento de células T com microbolhas usando seleção positiva

NOTA: Este protocolo detalha uma abordagem de seleção positiva CD3⁺ em pequena escala usando SAMBs.

1. Incubar 3 x 10⁸ PBMCs obtidos comercialmente em 2,5 mL de tampão de separação com anticorpo anti-CD3 biotinilado (OKT3) a uma concentração de 25 ng de anticorpo por 1 milhão de células (25 ng / M). Misture delicadamente pipetando para cima e para baixo e incube em temperatura ambiente por 10 min.
2. Adicione microbolhas de estreptavidina (SAMBs) na proporção de 0,5 (quantidade de SAMB):1 (quantidade de ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anticorpo anti-CD3 humano (OKT3) de biotina	Biolenda	Rolamento 317320
Leucopak	BioIVT	HUMANLMX100-0001129
PBMCs humanos normais	BioIVT	HUMANHLPB-0002562
Kit de microbolhas de estreptavidina (inclui o tampão de separação da Akadeum)	Akadeum	11110-000