Sistemas e Componentes Imunitários

Neste vídeo, demonstramos o isolamento de monócitos do sangue humano total por separação imunomagnética negativa. Os monócitos isolados podem ser usados para análises posteriores a jusante.

Neste vídeo, demonstramos o isolamento de células de Kupffer ou macrófagos hepáticos do fígado de camundongo. O fígado é perfundido com uma solução de digestão seguida de separação por gradiente de densidade. As células de Kupffer aderentes isoladas podem ser usadas para análises posteriores.

Este vídeo demonstra um protocolo livre de enzimas para isolar macrófagos do gânglio da raiz dorsal (DRG) de camundongos usando uma técnica de dissociação mecânica. Após a homogeneização do tecido DRG recém-coletado, anticorpos contra os receptores de superfície celular nos macrófagos são usados para marcar as células fluorescentemente, seguido pela realização de citometria de fluxo para confirmar a presença de macrófagos na amostra.

Neste vídeo, demonstramos o isolamento de linfócitos de um adesivo de Peyer de camundongo colhido. Os linfócitos isolados podem ser usados para análise posterior.

Neste vídeo, demonstramos o isolamento de células mononucleares do sangue periférico, PBMCs, contendo monócitos e linfócitos de um revestimento leucocitário humano por centrifugação com gradiente de densidade. Os PBMCs isolados podem ser usados para análise posterior.

Neste vídeo, demonstramos o isolamento de células B do sangue periférico humano usando anticorpos biotinilados específicos para células não B e microesferas magnéticas conjugadas com estreptavidina.

Neste vídeo, demonstramos o isolamento e a cultura de células estromais da medula óssea dos ossos longos de camundongos. Os BMSCs aderentes isolados podem ser usados para análise posterior.

Este vídeo demonstra o isolamento de células T de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) usando a tecnologia de classificação de células ativadas por flutuabilidade funcionalizada (BACS). A técnica de isolamento envolve a seleção positiva de células T CD3 +, marcando as células com anticorpos anti-CD3 biotinilados e separando as células ligadas a anticorpos usando microbolhas ligadas à estreptavidina.

Neste vídeo, descrevemos um protocolo para ativação de células T primárias humanas. A incubação de células T virgens com esferas magnéticas revestidas com anticorpos anti-CD3 e anti-CD28, seguida de tratamento com interleucina-2 ou interleucina-15, leva à ativação de células T virgens e sua diferenciação e proliferação em células T efetoras ou de memória.

Neste vídeo, demonstramos o isolamento de leucócitos hepáticos marginais do fígado de camundongo por perfusão forçada.

Este vídeo demonstra o isolamento de linfócitos, incluindo células natural killer ou células NK, do tecido hepático humano para expansão seletiva. A digestão enzimática e mecânica, seguida de separação por gradiente de densidade, promove o isolamento de linfócitos, incluindo células NK. Os linfócitos coletados podem ser usados para a expansão seletiva das células NK.

Este vídeo demonstra uma técnica para a expansão de células natural killer (NK) diretamente de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) usando uma linhagem de células alimentadoras. As PBMCs são co-cultivadas com células alimentadoras linfoblastóides geneticamente modificadas que expressam interleucina-21 ligada à membrana (mIL-21), e a cultura é suplementada com as citocinas interleucina-2 (IL-2) e interleucina-15 (IL-15). Juntos, esse coquetel de ligantes leva à expansão prolongada...

Este vídeo demonstra o procedimento de isolamento das células de Sertoli dos túbulos seminíferos de camundongos, um componente dos testículos. A digestão enzimática e as lavagens repetidas promovem a liberação de células de Sertoli na solução, que podem ser cultivadas posteriormente para proliferação e crescimento.

Este vídeo demonstra um protocolo para o isolamento baseado em marcação magnética de uma população de baixa concentração de células T CD4+Vδ1+γδ de células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs). Usando uma combinação de anticorpos anti-Vδ1 conjugados com FITC, microesferas magnéticas anti-FITC e esferas superparamagnéticas revestidas com anticorpos anti-CD4, as células T CD4 + Vδ1 + podem ser purificadas com sucesso da população PBMC.

Neste vídeo, demonstramos o isolamento de neutrófilos citotóxicos de alta densidade e neutrófilos de baixa densidade do sangue de um camundongo portador de tumor por centrifugação descontínua com gradiente de sacarose.

Este vídeo demonstra o procedimento de isolamento da rede de células imunes gengivais de um modelo de camundongo. A digestão enzimática libera o tecido gengival dos dentes e ossos aderidos, que é digerido mecanicamente, liberando células imunes da gengiva. As células isoladas estão prontas para experimentos imunológicos.

Este vídeo demonstra um método de lavagem peritoneal para isolar mastócitos maduros do tipo tecido conjuntivo da cavidade peritoneal de camundongos adultos. Ao isolar uma mistura de células imunes primárias da cavidade peritoneal, a proliferação seletiva de mastócitos é realizada em condições de cultura apropriadas.

Neste vídeo, descrevemos um protocolo para isolar células CD11b, incluindo microglia, de cérebros de filhotes de camundongos usando classificação de células ativadas por magnetismo. Os tecidos cerebrais são homogeneizados para obter suspensões unicelulares, que são incubadas com microesferas revestidas com anticorpos anti-CD11b, seguidas por uma separação baseada em coluna magnética para purificar a população de células CD11b+.

Este vídeo demonstra o procedimento de isolamento cirúrgico do linfonodo de drenagem inguinal de um modelo de camundongo. A incisão da região abdominal fornece acesso ao linfonodo inguinal, que é colhido cirurgicamente. O linfonodo inguinal translúcido colhido pode ser usado para estudos imunológicos.

Este vídeo demonstra uma técnica de dissecação para coletar linfonodos de drenagem poplítea das patas traseiras do camundongo. Os gânglios linfáticos desempenham um papel crítico na ponte entre a imunidade inata e adaptativa, e a coleta de linfonodos intactos - com estrutura tecidual preservada e viabilidade celular - pode ajudar a estudar as respostas imunes locais e sistêmicas.

Este vídeo demonstra o priming de monócitos primários em macrófagos. Os monócitos humanos primários podem ser isolados e diferenciados para um fenótipo pró-inflamatório semelhante ao M1 usando o fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF) ou para um fenótipo anti-inflamatório semelhante ao M2 usando o fator estimulador de colônias de macrófagos (M-CSF).

Este vídeo descreve um método in vitro para gerar macrófagos a partir de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos (iPSCs). A geração de macrófagos a partir de iPSCs ocorre em três estágios: (i) agregação de iPSCs em suspensão para formar corpos embrióides tridimensionais (EBs) que se diferenciam em células mesodérmicas, (ii) formação de células precursoras de macrófagos a partir de EBs diferenciados e (iii) diferenciação das células precursoras de macrófagos em macrófagos maduros e...

Neste vídeo, demonstramos um procedimento para induzir a diferenciação e polarização de monócitos derivados do sangue periférico em macrófagos M1 ou M2. A incubação com fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos, lipopolissacarídeo e interferon-gama produz macrófagos M1 pró-inflamatórios, enquanto a incubação com fator estimulador de colônias de macrófagos e interleucina-4 induz a produção de macrófagos M2 anti-inflamatórios.

Este vídeo demonstra um ensaio in vitro para gerar células dendríticas plasmocitoides (pDCs) a partir de células progenitoras linfóides comuns (CLPs). Após a co-cultura de CLPs purificados com células alimentadoras irradiadas com γ na presença de ligante tirosina quinase-3 (FL) semelhante a Fms, os CLPs se diferenciam em pDCs não aderentes, cuja presença é confirmada por citometria de fluxo.

Este vídeo demonstra a geração de células dendríticas imaturas, maduras e tolerogênicas, ou DCs, a partir de monócitos humanos. A incubação de monócitos com fatores de crescimento e citocinas leva à produção de DCs imaturas. Em resposta a moléculas reguladoras imunológicas, DCs imaturas se diferenciam em DCs tolerogênicas e maduras.

Este vídeo demonstra a diferenciação das células estromais da medula óssea (BMSCs) em adipócitos. No processo de duas etapas, na presença de fatores de crescimento e hormônios específicos, as BMSCs indiferenciadas primeiro se diferenciam em pré-adipócitos. A segunda etapa envolvendo o tratamento com glicose e insulina leva à formação de adipócitos maduros com múltiplas gotículas lipídicas.

Este vídeo demonstra uma técnica para a diferenciação de megacariócitos e a formação de plaquetas. As células-tronco progenitoras hematopoiéticas - isoladas do sangue do cordão umbilical humano - diferenciam-se em megacariócitos maduros na presença de trombopoietina. Os megacariócitos maduros produzem extensões citoplasmáticas denominadas proplaquetas, que dão origem a plaquetas individuais.

Este vídeo demonstra um protocolo para gerar células T funcionais específicas do antígeno a partir de células T imaturas derivadas de iPSC usando um sistema de cultura tímica tridimensional. A co-cultura de células T imaturas derivadas de iPSC com lobos tímicos fetais de camundongos empobrecidos de linfócitos endógenos resultou em maturação bem-sucedida das células T para formar emigrantes tímicos derivados de iPSC CD8αβ + MHC classe I + iPSC.

Neste vídeo, descrevemos um protocolo para purificação de plaquetas de sangue total murino e sua subsequente ativação com o agonista plaquetário trombina. Quando analisadas com citometria de fluxo, as plaquetas purificadas em repouso são caracterizadas com base na expressão de seu marcador de superfície celular CD41, enquanto as plaquetas ativadas purificadas co-expressam os marcadores de superfície CD41 e CD62P.

Este vídeo demonstra uma técnica in vitro para gerar e isolar armadilhas extracelulares de neutrófilos (TNEs). Os neutrófilos são isolados do sangue periférico e estimulados com acetato de miristato de forbol (PMA) para produzir TNEs. Durante a incubação, os neutrófilos passam por um processo de morte celular (NETosis) para liberar NETs compreendendo cromatina descondensada misturada com proteínas citoplasmáticas granulares.

Este vídeo demonstra a diferenciação in vitro do fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos ou células T auxiliares produtoras de GM-CSF (THGM). As células T virgens isoladas são estimuladas para diferenciação em THGM, o que é confirmado pela detecção de alta produção intracelular de GM-CSF e uma baixa expressão de outras citocinas específicas de células T auxiliares.

Este vídeo demonstra um ensaio colorimétrico para determinar a atividade de degranulação dos mastócitos. A enzima liberada pelos mastócitos hidrolisa o substrato e produz um produto colorido. A atividade de degranulação dos mastócitos foi medida como a porcentagem de liberação de enzimas fora da célula normalizada com o conteúdo total de enzimas na célula.

Neste vídeo, descrevemos um protocolo para a classificação baseada em citometria de fluxo de subpopulações de células B virgens, células B de memória e plasmablastos de plasmablastos de células B do sangue periférico humano. As diferentes subpopulações de células B podem ser distinguidas com base na ligação de anticorpos baseados em fluoróforo aos receptores CD19, CD27 e CD38 expressos nas superfícies das células B, seguida de classificação celular.

Este vídeo demonstra o uso do ensaio ELISpot para avaliar a função das células B secretoras de anticorpos, ASCs. Os anticorpos secretados pelas ASCs interagem com os fragmentos de anticorpos policlonais ligados à membrana, que são detectados pelos anticorpos IgG ou IgM conjugados com enzimas. A mancha colorida produzida em cada poço indica a presença do isotipo do anticorpo específico, que se correlaciona com a atividade secretora das células B.

Neste vídeo, descrevemos um protocolo para isolamento de células individuais de linfonodos pancreáticos murinos de drenagem (PDLNs) e a caracterização de células T reguladoras (Tregs) da população de células únicas usando citometria de fluxo. As Tregs são identificadas com base na expressão positiva dos marcadores de superfície celular CD4, CD25 e Nrp1, juntamente com os fatores de transcrição nuclear Foxp3 e Helios.

Fonte: Bello-Gamboa, A. et al., Imageando a Sinapse Imunológica Humana.J. Vis. Exp.(2019)
Este vídeo demonstra o estudo in vitro da formação de sinapses imunológicas entre uma célula apresentadora de antígeno e linfócitos T auxiliares usando um microscópio de fluorescência. Os receptores de células T dos linfócitos T auxiliares interagem com um complexo antígeno-MHC-II nas células apresentadoras de antígenos e formam sinapses imunológicas, seguidas por movimentos de vesículas secretoras em...

Neste vídeo, demonstramos uma técnica baseada em citometria de fluxo para determinar a proporção de células T assassinas induzidas por citocinas, células CIK, expandidas a partir de uma cultura de células mononucleares de sangue periférico.

Este vídeo demonstra um método de imagem para visualizar a secreção in situ de interferon-gama (IFN-γ) no baço de camundongo. Após a infecção bacteriana e a indução do acúmulo de IFN-γ dentro das células T e células assassinas naturais, o baço é colhido do camundongo. Após a obtenção de cortes de tecido, a imunocoloração é realizada para visualizar o IFN-γ dentro das células.

Neste vídeo, descrevemos um protocolo para a imunocoloração e visualização baseada em microscopia confocal de armadilhas extracelulares de macrófagos (METs) em tecido pulmonar murino. Os macrófagos residentes no tecido são caracterizados pela expressão do marcador de glicoproteína de superfície F4/80 específico do macrófago, enquanto os METs são visualizados marcando os marcadores MET metaloproteinase 9 da matriz, histona citrulinada H3 e cromatina extracelular.

Este vídeo demonstra uma técnica de homogeneização eficiente para gerar uma emulsão antigénio-adjuvante para induzir encefalomielite autoimune experimental (EAE) num modelo murino. A emulsão contém um autoantígeno - glicoproteína de oligodendrócitos de mielina (MOG) - na fase aquosa, cercada por uma fase oleosa contínua composta por uma bactéria patogênica inativada. A emulsão garante uma liberação sustentada de antígenos para uma resposta imune prolongada.

Este vídeo demonstra a visualização de linfócitos intraepiteliais γδ (IELs) em camundongos transgênicos usando microscopia confocal. O procedimento cirúrgico envolve a criação de uma linha de perfuração e a realização de uma incisão longitudinal para expor a mucosa intestinal e as vilosidades. Os camundongos transgênicos expressam proteínas repórter exclusivamente em γδ IELs, permitindo seu rastreamento. A imagem intravital captura o movimento dinâmico de γδ IELs marcados com fluorescência...

Este vídeo demonstra a geração e o isolamento de micropartículas derivadas de linfócitos T, LMPs, a partir de linfócitos T após o tratamento com actinomicina-D.

Este vídeo descreve um protocolo para isolar células T CD8+ específicas de antígenos raros usando células apresentadoras de antígenos artificiais (aAPCs) baseadas em nanopartículas magnéticas funcionalizadas com MHC-Igs carregados de peptídeos antigênicos e anticorpos anti-CD28. A interação dos aAPCs com células T CD8+ que expressam especificamente os receptores de células T direcionados a peptídeos antigênicos, seguida de sua expansão in vitro, resulta no enriquecimento e expansão dessa...

Este vídeo demonstra a separação de neutrófilos das secreções traqueais usando um dispositivo microfluídico com canais espirais. O dispositivo alcança uma separação eficiente com base no tamanho da célula, utilizando espessuras variadas e canais em forma trapezoidal. A interação entre as forças resulta em grandes neutrófilos se acumulando perto da parede interna, enquanto os eritrócitos e os agregados de mucina permanecem perto da parede externa, garantindo a separação eficaz dos neutrófilos.

Neste vídeo, demonstramos a radiomarcação intracelular de células T auxiliares usando anticorpos monoclonais conjugados com isótopos radioativos para imagens de tomografia por emissão de pósitrons não invasivas.