Artigo de método

Formação de sinapses imunológicas entre células T auxiliares e células apresentadoras de antígenos

8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Bello-Gamboa, A. et al., Imageando a Sinapse Imunológica Humana.J. Vis. Exp.(2019)

Este vídeo demonstra o estudo in vitro da formação de sinapses imunológicas entre uma célula apresentadora de antígeno e linfócitos T auxiliares usando um microscópio de fluorescência. Os receptores de células T dos linfócitos T auxiliares interagem com um complexo antígeno-MHC-II nas células apresentadoras de antígenos e formam sinapses imunológicas, seguidas por movimentos de vesículas secretoras em direção à sinapse, que é visualizada por microscopia fluorescente.

Protocolo

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1. Preparação de lâminas para aderir células Raji

  1. Adicione 150 μL de fibronectina (100 μg / mL) por poço a uma lâmina de câmara de 8 micropoços (lâmina de câmara de fundo de plástico) e incube-a por 30 min a 1 h a 37 ° C. Este substrato de adesão permitirá a ligação das células Raji ao fundo do poço (Etapa 2), a formação de conjugados vivos com células Jurkat (Etapa 4) e a captura de microscopia de lapso de tempo (etapa 6), e também é compatível posteriormente com a fixação opcional de paraformaldeído (PFA).
    NOTA: Para fixação de acetona, use lâminas de câmara de fundo de vidro e poli-L-lisina (20 μg/mL) em vez de ....

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Resultados

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A Figura 1 representa os conjugados sinápticos de Jurkat-Raji que foram obtidos seguindo o protocolo (etapa 5.2). A imagem representa o primeiro quadro de um experimento representativo de lapso de tempo. 2 x 105 células Raji e 2 x 105 células Jurkat foram adicionadas a um poço de 1 cm2. O painel superior mostra o canal de transmitância, o painel do meio consiste no ca.......

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Câmera Nikon DS-QI1MCNikonMQA11550Cabeça de câmera resfriada
CMACThermoFisher ScientificC2110Rastreador de celular azul
Células JURKATATCCATCC TIB-152Linfócitos T efetores
μ-Slide 8 poço ibiTreat, μ-Slide 8 poço Fundo de vidroIBIDICat.No: 80826, 80827Suportes para cultura celular e imagem celular
Microscópio NIKON Eclipse Ti-ENikonNIKON Eclipse Ti-EMicroscópio de fluorescência de campo amplo, totalmente motorizado, equipado com a opção Perfect Focus System (PFS)
Incubadora de estágio de microscópio com misturador de gás manual de 3 canais e borbulhador de gás/módulo de umidadeOKOLABH201-NIKON-TI-S-ERAtmosfera de cultura de células
Células RajiATCCATCC CCL-86Apc
GIBCO médio de RPMIThermoFisher Scientific21875034Meio de cultura
Streptococcus Enterotoxina E (SEE)Tecnologia de Toxinas, IncEP404Toxina bacteriana
Imagem do software JNihImagem JSoftware de imagem
Software Nikon NIS-ARNikonElementos NIS ARSoftware de captura e análise de imagens

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Etiquetas

Microscopia de Fluoresc nciaReceptores de C lulas TComplexo MHC IIMovimento de Ves culas SecretorasReorganiza o do CitoesqueletoConjuga o CelularMicroscopia Fluorescente

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