Um método de dissecção para colher linfonodos de drenagem poplítea murina para imagens ex vivo

Resumo

Fonte: Rezende, R. M., et al. Visualizando a estrutura dos linfonodos e a localização celular usando microscopia confocal ex-vivo. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra uma técnica de dissecação para coletar linfonodos de drenagem poplítea das patas traseiras do camundongo. Os gânglios linfáticos desempenham um papel crítico na ponte entre a imunidade inata e adaptativa, e a coleta de linfonodos intactos - com estrutura tecidual preservada e viabilidade celular - pode ajudar a estudar as respostas imunes locais e sistêmicas.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Procedimento cirúrgico para remoção do linfonodo de drenagem poplítea

1. Eutanásia de camundongos usando asfixia por CO₂ seguida de luxação cervical.
2. Imobilize os camundongos em decúbito ventral no estágio de acrílico com fita adesiva e aplique óleo mineral com um cotonete na panturrilha e no joelho (Figura 1A-D).
3. Faça uma incisão na linha média da panturrilha do calcanhar ao joelho (Figura 1E, F).
4. Dissocie a musculatura da panturrilha da pele (Figura 1F, G).
5. Exponha a fossa poplítea (Figura 1G). O linfonodo poplíteo aparecerá como uma esfera translúcida na fossa poplítea.
6. Remover o linfonodo poplíteo usando pinça curva de microcirurgia (Figura 1G).
7. Alternativamente, vire o mouse em decúbito dorsal e aproxime-se da fossa poplítea entre o bíceps femoral e o semitendíneo para a remoção do LN poplíteo, realizando uma incisão na linha média na panturrilha do calcanhar ao joelho, seguida de dissociação da musculatura da panturrilha da pele.
   nota: A fossa poplítea é uma depressão rasa localizada na parte de trás da articulação do joelho. Abra com cuidado para ver o linfonodo poplíteo.

Resultados

Figura 1: Preparação do linfonodo poplíteo. (A, B) Injeção subcutânea de mistura mestre de anticorpos FACS na almofada da pata. (C, D) 3 h após a injeção, eutanasiar o camundongo, imobilizá-lo em uma placa de acrílico com fita adesiva (C) e aplicar óleo mineral na pele abdominal para evitar a deposição de pêlo ao redor da incisão (D). (E) Realize um...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Prato de cultura Cellview	Greiner-Bio	627861	35x10 mm com fundo de vidro
Kimwipes	Marca Kimtech Science	Nº 7557	tamanho 21 x 20 cm / 100 folhas por caixa
Pinça curva para microcirurgia	Instrumentos cirúrgicos WEP	sob medida	12,5 cm
Tesoura curva para microcirurgia	Instrumentos cirúrgicos WEP	sob medida	11,5 cm