Um método para induzir inflamação da superfície ocular em um modelo murino

Abstract

Fonte: Singh, J., et al. Indução de inflamação da superfície ocular e coleta de tecidos envolvidos. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demonstra um método para induzir inflamação da superfície ocular e disfunção da glândula meibomiana em um modelo murino. A estimulação do sistema imunológico do camundongo usando um imunógeno e a reestimulação posterior com o mesmo imunógeno promovem a inflamação da superfície ocular, o que causa o entupimento da secreção da glândula meibomiana por meio de aggNETs produzidos por neutrófilos e leva à doença do olho seco.

Protocol

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Indução de inflamação da superfície ocular murina

1. Realize a preparação do imunógeno para imunização.
   1. Preparar o imunógeno na hora no dia da imunização, misturando ovalbumina (OVA, 50 mg/mL) e toxina da coqueluche (100 μg/mL) em soro fisiológico e o adjuvante hidróxido de alumínio (40 mg/mL) (ver Tabela de Materiais) na proporção de 1:1.
      cuidado: Realize a abertura, reconstituição e preparação....

Results

Figura 1: Excisão do tecido facial ao redor da região orbitária.A trilha de incisão é indicada em vermelho. Isso permite a excisão dos órgãos oculares e a investigação da influência e dos efeitos de várias terapêuticas administradas topicamente em órgãos oculares acessórios, como a conjuntiva e a córnea.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Gibco
Hidróxido de alumínio	Imject alum adjuvante	Nº 77161	40 mg/mL Concentração final: in vivo: 1 mg / 100 μL
Camundongos C57Bl/6, com idade entre 7 e 9 semanas	Laboratórios Charles River
Pinça curva	FST by Dumont SUÍÇA	5/45 11251-35
Tesoura afiada fina	FST Aço inoxidável, Alemanha	15001-08
Armário de segurança laminar	Herasafe
NaCl 0,9% (solução salina)	B.Braun
Ovalbumina (OVA)	Endofit, Invivogen	9006-59-1	10 mg/200 μL em solução salina
Toxina da coqueluche	ThermoFisher Scientific	PHZ1174	50 μg/ 500 μL em solução salina Concentração final: in vivo: 100 μg/ 100 μL
Petrídish	Greiner bio-one	Nº 628160
bisturi	Bisturi descartável de penas	Nº 21	Concentração final: in vivo: 300 ng/ 100 μL
Estereomicroscópio	Zaiss	Stemi508
Seringa (lavagem da córnea/íris)	BD Microlane	27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm
Seringa (imunização i.p)	BD Microlane	24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm