Uma técnica para avaliar a resposta imune contra um antígeno induzindo inflamação da pele

Resumo

Fonte: Yao, Y., et al. Imagem intravital de priming de neutrófilos usando camundongos repórter DsRed acionados por promotores de IL-1β. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo demonstra uma técnica in vivo para avaliar um antígeno de teste induzindo inflamação da pele em um modelo murino. O antígeno de teste - um hapteno em uma solução de óleo / acetona - é aplicado topicamente na pele da orelha do camundongo e a inflamação da pele é avaliada após um período adequado.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Indução de inflamação da pele em camundongos pIL1-DsRed

1. Anestesiar camundongo por injeção intraperitoneal (i.p.) de um coquetel anestésico contendo 100 mg / kg de cetamina, 10 mg / kg de xilazina e 1 mg / kg de acepromazina. Camundongos adequadamente anestesiados não mostram retirada da pata traseira para beliscar o dedo do pé.
2. Aplique o creme depilatório na superfície dorsal de ambas as orelhas do rato. Aguarde 30 segundos a 1 min. Limpe a superfície da orelha com algodão umedecido com água e deixe secar ao ar.
3. Meça a espessura da orelha usando um micrômetro e recoloque o mouse em uma gaiola separada. Observe até a recuperação da anestesia (~ 15 - 30 min). Para resolver a inflamação da pele induzida pelo produto de depilação, deixe o rato descansar por 3 dias antes de realizar mais experimentos.
4. Prepare oxazolona (OX) a 1,25% (p / v) dissolvendo 16,7 mg de OX em 1 ml de acetona e misturando 750 μl de solução de OX / acetona com 250 μl de azeite. Prepare a solução do veículo misturando 750 μl de acetona com 250 μl de azeite.
5. Re-anestesiar o camundongo por injeção intraperitoneal (i.p.) de coquetel anestésico (1.1). Meça a espessura da orelha como antes.
6. Aplique 12,5 μl de OX a 1,25% em cada lado da orelha direita. Aplique 12,5 μl de solução veículo de acetona/azeite de oliva em cada lado da orelha esquerda.
7. Mantenha o camundongo separado dos companheiros de gaiola até que esteja totalmente recuperado para evitar insultos às orelhas por outros camundongos, depois recoloque o camundongo em sua gaiola original e devolva-o ao alojamento dos animais.
   nota: A depilação pode resultar em pequenas inflamações da pele seguidas de alteração da espessura da orelha. Esta pequena inflamação será resolvida 3 dias depois, confirmada pela espessura normal da orelha. Após aplicação tópica por 24 horas, as orelhas tratadas com OX mostram inchaço significativo (p < 0,01) em comparação com as orelhas tratadas isoladamente com solução veicular.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cloridrato de cetamina	Hospira	NDC 0409-2051-05
xilazina	Laboratório LLOYD	NADA #139-236
Acepromazina	Boehringer Ingelheim	ANADA 200-361
Creme depilatório	Igreja e Dwight
acetona	Fisher Científico	A16P4
Oxazolona	Sigma-Aldrich	E0753