Gerando uma ferida cutânea excisional em um modelo de camundongo por meio de biópsia por punção

Resumo

Fonte: Anderson, L. S. et al., Um modelo de camundongo para avaliar a resposta imune inata à infecção por Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra um procedimento de biópsia por punção para criar uma ferida precisa em um modelo de camundongo. A excisão expõe a camada subcutânea da pele, fornecendo um local adequado para estudar as respostas imunes à infecção localizada por patógenos.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Fonte e caixa do mouse

1. Derive camundongos com proteína fluorescente verde aprimorada com Lysozyme M (LysM-eGFP) em um fundo genético C57BL / 6J, conforme descrito anteriormente. Derive camundongos LysM-EGFP× resposta primária de diferenciação mielóide 88 (MyD88)-/- cruzando camundongos LysM-EGFP com camundongos MyD88-/- em um fundo C57BL/6J.
2. Ratos domésticos em um viveiro. Para esses estudos, os animais foram alojados na Universidade da Califórnia, Davis, em grupos antes da cirurgia e alojados individualmente após a cirurgia. Use camundongos entre as idades de 10 a 16 semanas.

2. Ferimento Excisional da Pele

1. Administre 100 μL de cloridrato de buprenorfina 0,03 mg / mL (~ 0,2 mg / kg) a cada camundongo por meio de injeção intraperitoneal.
2. Vinte minutos após a injeção, coloque 2-4 camundongos em uma câmara com 2-3 litros por minuto (LPM) de oxigênio com 2-4% de isoflurano. Assim que os camundongos estiverem totalmente anestesiados, transfira os camundongos um de cada vez para um cone nasal conectado a 2-3 LPM de oxigênio com 2-4% de isoflurano. Verifique se os ratos estão totalmente anestesiados, apertando firmemente cada pata traseira entre o polegar e o indicador. Prossiga para a próxima etapa se o animal não responder ao beliscão.
3. Raspe uma seção de 1 polegada por 2 polegadas na parte de trás do mouse com uma tesoura elétrica e limpe a área de aparas de pele usando um lenço limpo ou gaze. Evite usar loção depilatória, pois pode causar excesso de inflamação.
4. Limpe a parte de trás do mouse primeiro com gaze embebida em iodopovidona a 10% e depois com gaze embebida em etanol a 70%. Limpe a área em um padrão espiral, movendo-se para fora do centro da área cirúrgica. Aguarde aproximadamente 1 minuto para que a área cirúrgica seque antes da cirurgia.
5. Segure a parte de trás raspada do mouse frouxamente entre dois dedos e pressione firmemente uma biópsia por punção estéril de 6 mm no centro da área cirúrgica preparada. Não puxe a pele esticada.
   1. Torça a biópsia por punção para criar um contorno circular na pele que corta totalmente a pele em pelo menos uma seção do contorno. Tenha cuidado para não cortar a fáscia ou tecido subjacente.
   2. Use tesouras e pinças estéreis para cortar a epiderme e a derme seguindo o padrão circular impresso pela biópsia por punção.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Punção de biópsia descartável de 6 mm	Integra Miltex	33-36
Cloridrato de buprenoprina injetável	Fornecimento Médico Ocidental	Nº 7292	0,3 mg/ml
Ratos C57BL/6J	Laboratório Jackson	Episódio 664
Camundongos LysM-eGFP	Faculdade Thomas Graff Albert Einstein de Nova York	NA
Mouses MyD88 KO	Laboratório Jackson	Pedido 9088
Esponjas não tecidas	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5 cm x 5 cm
Solução de iodopovidona a 10%	Aplicare	697731