Detecção de aderência bacteriana às células hospedeiras usando imagens de fluorescência

Abstract

Fonte: Yang, J., et al. Detecção automatizada e de alto rendimento da adesão bacteriana às células hospedeiras. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo demonstra o ensaio de aderência bacteriana para avaliar a adesão bacteriana marcada com GFP à cultura de células epiteliais para estudar a dinâmica das interações patógeno-hospedeiro usando imagens baseadas em microscopia de fluorescência.

Protocol

1. Adesão bacteriana e coloração de células hospedeiras

1. Primeiro, lave as monocamadas de células A549 semeadas três vezes com PBS 1x quente. Para cada lavagem, adicione 100 μL de 1x PBS a cada poço, pipete suavemente para cima e para baixo três vezes, descarte 1x PBS ou aguarde 10 s após a adição e, em seguida, aspire para remover 1x PBS. Para determinar a cinética da associação bacteriana, cubra as células com 100 μL das concentrações desejadas de suspensão bacteriana com diferentes MOIs (0, 1, 10 e 100). Gire as bactérias a 200 x g por 10 min e incube as células A549 infectadas a 37 ° C, 5% de CO₂ por mais 1 h.
   ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
10x PBS	VWR	Rolamento 45001-130
4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)	Thermo Fisher	Nº 62248	Corante de coloração de células hospedeiras
Placa de 96 poços	Corning	3882	Meia área bem, fundo plano e transparente
Células A549	ATCC	CCL 185	Linhagem celular de mamíferos
centrifuga	Eppendorf	5810R
OD600 Dilufotômetro	IMPLEN
Caldo de soja típico	Células de crescimento	MBPE-4040
F-12k médio	ATCC	302004	Meio de cultura celular A549
Soro fetal bovino	Corning	35-016-CV