Uma técnica de imagem para estudar a resposta do cálcio em células infectadas por bactérias

Resumo

Fonte: Smail, Y., et al. Imaging Ca²⁺ Respostas durante a infecção por Shigella de células epiteliais. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo demonstra uma técnica para detectar a resposta local e global do íon cálcio após a infecção por Shigella de células epiteliais humanas. A Shigella invade as células hospedeiras e libera efetores de invasão, impactando os níveis de cálcio intracelular. A amplitude e a frequência do cálcio citosólico local e global são estudadas usando um indicador fluorescente.

Protocolo

1. Preparativos

1. Preparação de bactérias
   1. Coloque as bactérias - cepa de Shigella do tipo selvagem que expressa a adesina AfaE (M90T-AfaE) - em uma placa de ágar tripticase soja (TCS) contendo 0,01% de vermelho Congo (CR) e incube-as por 18 h a 37 ° C.
      nota: Para aumentar sua reprodutibilidade, as placas de Shigella obtidas na etapa 1.1.1 são armazenadas a 4 ° C e devem ser usadas dentro de uma semana, pois todas as colônias em meio CR acabarão ficando vermelhas com o tempo.
   2. Inocule a pré-cultura do caldo TCS colhendo 3 colônias vermelhas das placas de estria....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Fluo-4 AM	Invitrogen	F14201
Metamorph versão 7.7	Imagem Universal
Sistema de iluminação CoolLED pE-2	Roper Científico
Micro-prato 35 mm, altura	IBIDI	Rolamento 81156
Caldo de Tripticase de Soja (TCS)	Thermofisher	B11768
Ágar TCS	Thermofisher	B11043
Vermelho Congo	Sigma-Aldrich	Rolamento 75768
M90T-AfaE	Sun et al. 2017		Shigella flexneri sorotipo V. expressando a adesina AfaE
ipgD-AfaE	Sun et al. 2017		Cepa mutante ipgD isogênica expressando a adesina AfaE