Um modelo de infecção de feridas na pele murina para estudar a resposta imune contra um patógeno bacteriano

Resumo

Fonte: Anderson, L. S., et al. Um modelo de camundongo para avaliar a resposta imune inata à infecção por Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo demonstra uma técnica para gerar um modelo murino de infecção de ferida cutânea. Ao infectar camundongos - modificados para expressar uma proteína fluorescente em neutrófilos - com um Staphylococcus aureus bioluminescente geneticamente modificado - uma bactéria patogênica. A carga bacteriana no local da infecção e a dinâmica de recrutamento de neutrófilos podem ser estudadas usando imagens de animais inteiros.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Fonte e caixa do mouse

1. Derive camundongos LysM-eGFP (proteína fluorescente verde aprimorada (eGFP) inserida na região promotora de Lysozyme M (LysM)) em um fundo genético C57BL / 6J, conforme descrito anteriormente. Derive camundongos LysM-EGFP×MyD88^-/- cruzando camundongos LysM-EGFP com camundongos MyD88^-/- (proteína 88 de resposta primária de diferenciação mieloide) em um fundo C57BL/6J.
2. Ratos domésticos em um v....

Resultados

Figura 1: Correlação entre as contagens de DO₆₀₀ e UFC para ALC2906. 3-4 ALC2906 colônias SH1000 foram retiradas de uma placa de ágar e transferidas para TSB com 10 μg/mL de cloranfenicol para cultura durante a noite. No dia seguinte, a suspensão foi dividida 1:50 em TSB com 10 μg/mL de cloranfenicol e cultivada. A densidade óptica a 600 nm (OD₆₀₀) foi medida em intervalos regul.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubo de fundo redondo de polipropileno de 14 mL	falcão	352059
Punção de biópsia descartável de 6 mm	Integra Miltex	33-36
S. aureus bioluminescente	Lloyd Miller, Johns Hopkins	ALC 2906 SH1000
Ágar Sangue Bovino, 5%, Diagnóstico Resistente	VWR	Rolamento 10118-938
Cloridrato de buprenoprina injetável	Fornecimento Médico Ocidental	Nº 7292	0,3 mg/ml
Ratos C57BL/6J	Laboratório Jackson	Episódio 664
Cloranfenicol (pó cristalino)	BioReagentes Fisher	BP904-100
DPBS (1X)	Gibco	14190-144
Seringas de insulina	Becton, Dickson e Companhia	329461	.35 mm (28 G) x 12,7 mm (1/2'')
Sistema de imagem in vivo IVIS Spectrum	Perkin Elmer	124262
Software de imagem viva - série IVIS Spectrum	Perkin Elmer	128113
Camundongos LysM-eGFP	Faculdade Thomas Graff Albert Einstein de Nova York	NA
Espectrofotômetro de microvolume	ThermoFisher Scientific	ND-2000
Mouses MyD88 KO	Laboratório Jackson	Pedido 9088
Esponjas não tecidas	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5 cm x 5 cm
Solução de iodopovidona a 10%	Aplicare	697731
Caldo de soja tríptico	Becton, Dickson e Companhia	211825